艾美捷 Abbexa Plasmid MiniPrep Kit 提供了一種從≤20 ml (LB) 或 ≤4 ml 細(xì)菌細(xì)胞培養(yǎng)物中分離高質(zhì)量質(zhì)粒 DNA 的有效方法，DNA 產(chǎn)量高達(dá) 40 µg。*配制的裂解緩沖液和中和緩沖液允許無(wú)差錯(cuò)視覺(jué)識(shí)別完整的細(xì)菌細(xì)胞裂解和中和。純化的質(zhì)粒 DNA 適用于多種分子生物學(xué)應(yīng)用，包括限制性內(nèi)切酶消化、連接、轉(zhuǎn)化、DNA 測(cè)序和轉(zhuǎn)染。

艾美捷Abbexa 質(zhì)粒 MiniPrep 試劑盒套件內(nèi)容：

零件 50 次 200 次

重懸緩沖液 (RB) 15 毫升 60 毫升

裂解緩沖液 (LB) 15 毫升 60 毫升

中和緩沖液 (RB) 20 毫升 80 毫升

洗滌緩沖液 (WB) 10 毫升 2 × 20 毫升

洗脫緩沖液 (EB) 5毫升 10 毫升

核糖核酸酶 A (10 毫克/毫升) 150 微升 600 微升

帶收集管的小型質(zhì)粒離心柱 50 2×100

艾美捷Abbexa 質(zhì)粒 MiniPrep 試劑盒檢測(cè)程序：

1、通過(guò)將整個(gè) RNase 小瓶添加到重懸緩沖液瓶中來(lái)制備工作重懸緩沖液。充分混合并儲(chǔ)存在 2-8 °C 之間。

2、通過(guò)向每個(gè)洗滌緩沖液瓶中加入 100% 乙醇來(lái)制備工作洗滌緩沖液：40 ml (50 rxns)；或 2 × 80 ml (200 rxns)。攪拌均勻。

3、將過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌懸浮液添加到微量離心管中。測(cè)量 LB 培養(yǎng)基體積并記下下表中所需的試劑體積。

LB培養(yǎng)基 工作重懸緩沖液  裂解緩沖液  中和緩沖液

≤ 5 毫升 250 微升 250 微升 350 微升

5-10毫升 500 微升 500 微升 700 微升

10-15 毫升  750 微升  750 微升  1050 微升

15-50 毫升  1000 微升  1000 微升  1400 微升

4、以 10,000 × g 離心 1 分鐘。棄去上清液。

5、根據(jù)上表，將適量的工作重懸緩沖液（與 RNase A 預(yù)混合）添加到細(xì)胞沉淀中，并通過(guò)移液器將其*重懸。

6、根據(jù)上表添加適量的裂解緩沖液（藍(lán)色液體）。將試管倒置 4-6 次，立即*混合。裂解液應(yīng)從不透明變?yōu)榱了{(lán)色。

7、在完成第 6 步后的 5 分鐘內(nèi)，根據(jù)上表添加適量的中和緩沖液（黃色液體）。通過(guò)顛倒試管 4-6 次*混合。中和完成后，裂解液將變?yōu)辄S色，并形成淡黃色沉淀。讓裂解物在室溫下靜置 2 分鐘。

8、以 12,000 × g 離心 5 分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到離心柱中。

9、以 12,000 × g 離心 1 分鐘。丟棄流過(guò)。

10、向柱中加入 650 µl 工作洗滌緩沖液（加乙醇），然后以 12,000 × g 離心 1 分鐘。丟棄流過(guò)。

11、將空柱以 12,000 × g 離心 1-2 分鐘，以*去除任何殘留的洗滌緩沖液。

12、將離心柱放入干凈的微量離心管中，然后將 30-100 µl 洗脫緩沖液或無(wú)菌蒸餾水 (pH > 7.0) 直接添加到柱基質(zhì)的中心。為獲得更高的產(chǎn)量，請(qǐng)將洗脫緩沖液或水預(yù)熱至 65 °C）。讓色譜柱在室溫下靜置 1 分鐘。以 10,000 × g 離心柱 1 分鐘以洗脫 DNA。分離的質(zhì)粒 DNA 可以立即使用，也可以儲(chǔ)存在-20°C。

注：

1、在室溫下進(jìn)行所有離心步驟。

2、使用前，請(qǐng)檢查 Lysis Buffer 溶液是否混濁。如果渾濁，將瓶子在設(shè)置為 37 °C 的水浴中加熱，以確保所有內(nèi)容物都*溶解。使用后立即擰緊瓶蓋以避免 pH 值變化。

3、該試劑盒的zui 大 DNA 產(chǎn)量為 40 µg。如果質(zhì)粒 DNA 產(chǎn)量低，增加細(xì)菌培養(yǎng)量。

4、使用上述建議的工作重懸緩沖液、裂解緩沖液和中和緩沖液的體積，因?yàn)檫^(guò)多的細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致不*裂解，從而影響質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和純度。

5、5 ml LB 培養(yǎng)基相當(dāng)于 1 次 rxn。

Abbexa研究涵蓋一抗、二抗、蛋白質(zhì)、ELISA試劑盒、酶以及其他用于研究的試劑盒和工具。無(wú)論是進(jìn)行學(xué)術(shù)研究，藥物開(kāi)發(fā)，疾病研究還是其它生物學(xué)研究，Abbexa的單克隆抗體，多克隆抗體，蛋白質(zhì)和生物試劑均旨在促進(jìn)科研工作者的研究。艾美捷科技是Abbexa的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。