理解免疫分析的基本原理很容易。基于抗體的免疫分析系統的基本組成部分有三個：用于檢測和定量的抗原；針對這種抗原的特異性抗體；以及測量給定樣本中抗原量的系統。雖然這似乎是一個非常簡單的系統，但在許多情況下，為了快速方便地進行測量，還需要許多其他分析材料。下面就來看一下Enzo Life Sciences丨艾美捷的夾心ELISA&競爭ELISA測定原理。

一、Enzo Life Sciences丨艾美捷 免疫測定/夾心ELISA試劑盒

免疫測定分析，也稱為夾心ELISA（酶聯免疫吸附試驗），使用兩種抗原特異性抗體捕獲或“夾心"在孔中檢測抗原。免疫計量分析顯示抗原濃度和底物反應之間存在直接相關性。免疫計量分析通常使用涂在平板上的“捕獲"抗體結合感興趣的抗原。在第二次孵化期間，抗原被第二個抗體結合“檢測"抗體，也是抗原的特異性抗體。檢測抗體可以由二級抗體酶結合物結合，或者檢測抗體本身是酶結合物。當向分析中添加顯色底物以顯色時，抗原濃度高的樣品比抗原濃度低的樣品產生更多信號抗原濃度，產生與樣本中抗原量成正比的信號。然后，這種相關性可用于從標準曲線推斷未知樣本中的抗原濃度。

二、Enzo Life Sciences丨艾美捷 競爭ELISA試劑盒

在競爭性酶免疫分析（EIA）中，樣本中的抗原與與報告酶結合的抗原競爭有限的抗體結合位點。這就產生了抗原濃度和底物周轉率之間的反比關系。競爭性EIA通常使用一種針對小分子量抗原的抗體，通常小于10000道爾頓。在孵化過程中，抗原含量高的樣品導致未標記抗原的結合量大于結合抗原。當向分析中添加顯色底物以顯色時，抗原濃度高的樣品產生的信號低于抗原濃度低的樣品，從而在樣品中的抗原濃度與分析中的顯色之間產生負相關。這種關系可用于從標準曲線推斷未知樣本中的抗原濃度。這種反應是為數不多的用于小分子量抗原（如類固醇、藥物、脂質和肽）的方法之一。

左圖：夾心ELISA實驗：

將樣品加入到包裹有捕獲抗體的容器中，并孵育清洗微孔以去除未結合的分子添加檢測抗體并孵育以與抗原結合，形成“三明治"清除多余的檢測抗體加入二級抗體酶結合物并清洗。結合酶通常是辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）

注：如果報告酶直接與檢測抗體結合，則可省略該步驟添加底物并孵育以產生信號讀板器中的測量信號。

右圖：競爭ELISA實驗：

將樣品加入到涂有抗物種抗體的容器中酶結合抗原加入樣品中，將捕獲抗體加入培養皿中并孵育。樣本中的抗原和酶結合抗原競爭與捕獲抗體的結合。包被在孔中的抗物種抗體結合捕獲抗體。清洗微孔以去除多余的抗體和酶結合抗原，添加基板以產生信號讀板器中的測量信號。

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