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高效液相色譜法具有高柱效、高選擇性、分析速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。該法已成為現(xiàn)代分析技術(shù)的重要手段之一，目前在化學、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保、農(nóng)業(yè)等科學領(lǐng)域獲得廣泛的應(yīng)用。
和氣相色譜一樣，液相色譜分離系統(tǒng)也由兩相——固定相和流動相組成。
一、固定相
高效液相色譜固定相以承受高壓能力來分類，可分為剛性固體和硬膠兩大類。
剛性固體以二氧化硅為基質(zhì)，可承受7.0×108~1.0×109Pa的高壓，可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒。如果在二氧化硅表面鍵合各種官能團，可擴大應(yīng)用范圍，它是目前z`ui廣泛使用的一種固定相。
硬膠主要用于離子交換和尺寸排阻色譜中，它由聚苯乙烯與二乙烯苯基交聯(lián)而成。可承受壓力上限為3.5×10Pa。固定相按孔隙深度分類，可分為表面多孔型和全多孔型固定相兩類。
1.表面多孔型固定相
它的基體是實心玻璃球，在玻璃球外面覆蓋一層多孔活性材料，如硅膠、氧化硅、離子交換劑、分子篩、聚酰胺等。這類固定相的多孔層厚度小、孔淺，相對死體積小，出峰迅速、柱效亦高；顆粒較大，滲透性好，裝柱容易，梯度淋洗時能迅速達到平衡，較適合做常規(guī)分析。由于多孔層厚度薄，大允許量受到限制。
2.全多孔型固定相
由直徑為10nm的硅膠微粒凝聚而成。這類固定相由于顆粒很細（5~10um），孔仍然較淺，傳質(zhì)速率快，易實現(xiàn)高效、高速。特別適合復(fù)雜混合物分離及痕量分析。
二、流動相
由于高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親合并參與固定相對組分的競爭，因此，正確選擇流動相直接影響組分的分離度。對流動相溶劑的要求是：
（1）溶劑對于待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選擇性。
（2）溶劑與檢測器匹配。對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長要長。所謂溶劑的紫外截止波長指當小于截止波長的輻射通過溶劑時，溶劑對此輻射產(chǎn)生強烈吸收，此時溶劑被看作是光學不透明的，它嚴重干擾組分的吸收測量。對于折光率檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，以達到z`ui高靈敏度。
（3）高純度
由于高效液相色譜靈敏度高，對流動相溶劑的純度也要求高。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽峰”。
（4）化學穩(wěn)定性好
（5）低粘度（粘度適中）若使用高粘度溶劑，勢必增高壓力，不利于分離。常用的低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等；但粘度過低的溶劑也不宜采用，例如戊烷和yi醚等，它們?nèi)菀自谏V柱或檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離。