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高效液相色譜HPLC的操作流程

閱讀:5564        發布時間:2022/2/28
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  高效液相色譜HPLC的操作流程:
 
  1.將已經過濾并脫氣的流動相注入儲液罐;
 
  2. 用流動相沖洗金屬過濾器,然后將過濾器浸入儲液罐的流動相中;
 
  3. 將儲液罐放置在一定的高度,以避免由于搬運和其他操作人員的移動而造成不必要的跌落。
 
  4. 然后按以下順序依次啟動高效液相色譜儀:泵→檢測器→高效液相色譜軟件→按預先計劃的方法設置軟件參數,如分析時間、檢測波長、流速等。
 
  5. 啟動泵,運行5分鐘,主要是為了排除系統中的氣泡,結束后關閉所有排氣閥;
 
  6. 然后按照預先計劃的速度,以固定的速率,如1mL/min左右,運行流動相,走基線,直到基線平穩,就可以在計算機軟件上進行監視;
 
  7. 基線平穩后,在軟件中設置樣品的運行參數,如流速和分析時間等。分析時間會因樣品、流速、柱長等因素變化。
 
  8. 參數設置完畢后,將固定體積的樣品溶液注入進樣閥,然后在軟件中啟動注入命令,進樣器中的樣品溶液就隨流動相進入色譜柱;
 
  9. 通過軟件監視各項讀數,當檢測器檢測到樣品所有峰值,停止運行并設置新的進樣。在下一個樣品分析前,建議留出5-10分鐘,待流動相通過色譜柱,以便清洗之前樣品的殘留物;確認基線穩定后,進行下一次注射。
 
  10. 分析結束后,先關閉檢測器,然后關閉泵,最后關閉軟件。

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