阿苯達唑的危害及檢測目的

阿苯達唑（ABZ）又名丙硫咪唑，是苯并咪唑類驅(qū)蟲藥物，因其治療效果好、毒性小等方面的優(yōu)勢，被廣泛用于治療動物的腸道寄生蟲感染病，是目前獸醫(yī)臨床使用*泛藥物之一。阿苯達唑進入動物體內(nèi)后會快速代謝為阿苯達唑亞砜（ABZSO），阿苯達唑亞砜進一步轉(zhuǎn)化為阿苯達唑砜（ABZSO2），最終代謝為2-氨基阿苯達唑砜（ABZSO2-2-NH2）。因此，為監(jiān)控阿苯達唑藥物的使用情況，保障動物源性食品的安全，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留*》中明確規(guī)定了阿苯達唑在所有食品動物靶組織中的殘留標志物及殘留*。

本文闡述了如何將阿苯達唑及其代謝物從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成高效液相色譜儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據(jù)國標GB 29687-2013，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：阿苯達唑、阿苯達唑亞砜、阿苯達唑砜、2-氨基阿苯達唑砜

應(yīng)用范圍：水產(chǎn)品（蝦、蟹、魚）

高效液相色譜法

方法原理：試料中殘留的阿苯達唑及代謝物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，高效液相色譜-熒光檢測器測定，外標法定量。

前處理儀器： 

分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；均質(zhì)機；離心機；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；氮吹儀；梨形瓶（100mL）；濾膜（有機相0.45 μm）。

檢測儀器：HPLC-FLD

試樣的制備與保存

取適量新鮮或冷凍的魚，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉；蝦，去頭、去殼，取肌肉部分。絞碎，并使均質(zhì)。

取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。

取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。

取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。

試料于零下20 ℃ 以下保存。

前處理方法

提取：稱取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯15 mL，均質(zhì)30 s，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，殘渣備用。另取一50 mL離心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均質(zhì)機30 s，洗滌液于殘渣中，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用20 %甲醇溶液1.0 mL溶解殘渣。

除脂：將上述溶液移入10 mL離心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，棄正己烷層液，再加入正己烷1 mL，重復(fù)操作兩次，取下層液備用。

凈化：備用液中加0.04 mol/L磷酸1 mL，混勻，加二氯甲烷1.5 mL，混合1 min，4000 r/min離心5 min，取二氯甲烷液于10 mL離心管中，再加二氯甲烷1.5 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次二氯甲烷液于10 mL離心管中，于35 ℃氮氣吹干；用0.02 mol/L磷酸氫二鈉溶液1.0 mL溶解殘余物，加乙酸乙酯2 mL，混合1 min，4000 r/min離心5 min，將乙酸乙酯液移入另一10 mL離心管中，再向磷酸氫二鈉溶液中加乙酸乙酯2 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次乙酸乙酯液，于40 ℃氮氣吹干，用20 %甲醇-水1.0 mL溶解殘留物，濾膜過濾，供液相色譜測定。

提取：稱取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯15 mL，均質(zhì)30 s，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，殘渣備用。另取一50 mL離心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均質(zhì)機30 s，將此液倒入上述殘渣中振蕩提取5 min，4000 r/min離心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入20 %甲醇溶液1.0 mL溶解殘渣。

除脂：將上述溶液移入10 mL離心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，去除正己烷層，再加入正己烷1 mL，依法重復(fù)操作兩次。下層溶液過0.45 μm有機相濾膜，供液相色譜測定。