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反相液相色譜法測定硝基酚類物質

閱讀:1546      發布時間:2017-12-20
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[目的要求]

1、了解反相離子對色譜法分離離子型化合物的基本原理及操作條件。

2、掌握內標法色譜定量分析方法。

[基本原理]

反相離子對色譜是用疏水的固定相和有低濃度反子的極性緩沖液作流動相進行色譜分離的一種方法。它可以用于離子型或可解離化合物的分離,有代替離子交換色譜的趨勢,成為液相色譜的一個很有生氣的組成部分。容易被接受的機制是認為解離的溶質與流動相中的反粒子形成疏水性離子對,然后按反相色譜的規律進行分離。反離子的大小及濃度、有機改良劑的濃度和pH值均是控制分離的重要因素。

硝基酚類可解離的有機酸,分離時采用四丁基銨離子作為反離子,在弱堿性條件下,硝基酚類按pKa值減小的順序流出。

內標法是廣泛使用的色譜定量方法。在進行色譜定量之前,要選擇合適的內標物,并準確測定校對因子。硝基酚類的測定采用2,4—二氯苯酚做內標物。測定校對因子fi時,將一定量組分i的標準品,與一定量的內標物混合,進行色譜分離,測得的峰面積分別為Ai和AsW代表重量

進行定量分析時,將需一定量的內標物S加入欲測的樣品中,進行色譜分離,測得的峰面積分別為Ai′和As′ 則:

W’i W’  s′分別為欲測的樣品中組分i的量內標物S的量

[實驗條件]:

固定相:YWG—C18流動相:甲醇/水 55:45,含20 mmol/L四丁基溴化銨,并用KH2PO4/K2HPO4調整pH值在7.5—8.5之間。流量:1 mL/min檢測:紫外—254 nm,0.02 AUFS溫度:室溫紙速:5 mm/min

標準測試:對硝基苯酚;2,4—二硝基苯酚;2,5—二硝基苯酚2,6—二硝基苯酚;2,4,6三硝ji苯酚內標物:2,4—二氯苯酚

[操作步驟]

1、標準品溶液及內標物溶液的配制

(1)準確稱取鄰硝基苯酚10 mg,對硝基苯酚16 mg2,4—二硝基苯酚10 mg2,5—二硝基苯酚6 mg2,6—二硝基苯酚10 mg2,4,6三硝ji苯酚20 mg。溶解于50 mL甲醇,轉入100 mL容量瓶中,用水稀釋刻度搖勻。

(2)準確稱取2,4—二氯苯酚0.3克,配成100 mL甲醇/水溶液。

2、測定校對因子Fi

將1 mL內標物溶液1 mL標物溶液混合。待儀器穩定后,注入10 μL混合液,記錄色譜圖1

1、 樣品的測定

將欲分析的樣品與內標物溶液混合。注入10 μL,記錄色譜圖2。根據保留數值,確定樣中含有些成分。

[數據處理]

1、測量色譜圖1和圖2中各峰面積。

2、根據色譜圖1的數據,計算各組分的相對校正因子。

3、根據色譜圖2的數據,計算樣中各組分的含量,g/mL

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