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細胞消化液的使用方法介紹

閱讀：1744 發(fā)布時間：2022-7-20

一般細胞長至80%-90%密度則需要傳代消化，貼壁細胞傳代前，需要把細胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來，細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。

　　細胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶，無動物源性，無病毒污染可能性，且內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)（<0.06EU/mL）。可以替代動物源性胰蛋白酶。可用于哺乳動物細胞、間充質(zhì)干細胞等原代細胞。

　　使用方法：

　　1、在顯微鏡下觀察細胞，當(dāng)細胞融合度達到90%，即可傳代。

　　2、在超凈臺/安全柜中，吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液，加入PBS溶液洗一次，加入細胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。

　　3、室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-3分鐘（不同細胞類型消化時間略有差異），顯微鏡下觀察到大部分細胞邊緣開始脫離皿/瓶底。

　　4、加入與消化液等倍體積細胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞，并輕輕吹打混勻，使細胞*分散。

　　5、將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，1200rpm離心3min。

　　6、棄上清，加入對應(yīng)細胞培養(yǎng)液，重懸細胞，按比例進行傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)。