紫外可見近紅外分光光度計系數倍率法

系數倍率法

（1）系數倍率法儀器原理（見圖 12） 雙波長分光光度法中用等吸收點波長消除干

擾，是測定兩組分體系的一個好方法。但是在干擾組分的吸收光譜中，找不出等吸收點時，

就不能用此法消除干擾。系數倍率法克服等吸收波長的局限性。

系數倍率法在雙波長分光光度計中增加一個系數倍率器（見圖 12），獲得差示信號與干

擾組分含量無關。

⊿A＝Aλ₂－K₁Aλ₁＝kC

式中⊿A――差示吸光度值；

Aλ₂――樣品溶液在測量波長 λ₂ 處的總吸光度值；

Aλ₁――樣品溶液在參比波長處的總吸光度值；

K₁ ――校正系數，通過 K₁ 校正扣除了干擾組分吸光度；

K ――標準曲線斜率；

C ――樣品溶液待測組分濃度。

按著上述原理，可用下式求 K₁ 系數。

因此，只要測出干擾組分在 λ₂ 和 λ₁ 處的吸光度值，便求解 K₁，實際上它是對干擾組

分的校正系數。K₁ 與干擾組分濃度無關，只與 λ₁ 位置有關。

圖 12：各種吸收光譜的組合及系數倍率法儀器示意圖

1－光源；2—單色器；3—切光器；4—吸收池；5—光電倍增管；6—初級放大器；

7—同步放大器；8—對數轉換器；9—系數倍增器；10—差算電路；11—數字電壓表

（2）舉例

①食品紅 2 號（R₂）和山梨酸的測定 由圖 13 可見，為測定 R₂ 和山梨酸混合樣品兩

組分，可選山梨酸的 λ_ma_x＝262 nm 為測定波長 λ₂，以 320 nm 為參比波長（λ₁）測定山梨酸

含量（Aλ₂> Aλ₁，按 2－16 式求 K）。而以 262 nm 和 240 nm 為組合波長測定食品紅 2 號（R₂）。

②復方黃連素注射液中甲氧芐氨嘧啶（TMP）含量的系數倍率法測定

硫酸氫黃連素 λ_ma_x＝344 nm。TMP 的 λ_ma_x＝271 nm，測：

⊿A₂7₁（TMP）＝A₂7₁－K•A₃44

釋成四種濃度，分別在 271nm 和 344nm 處測定吸光度，并計算K值。然后在 271nm 和 344nm

處測定樣品的吸光度值，求出⊿A₂1₁（TMP）。可由標準對照法求出 TMP 含量。

③ 增效聯磺膠囊中三組分含量可用雙波長系數倍率法測定增效聯磺膠囊中含有磺胺

甲基異惡唑（SMZ）、磺胺嘧啶（SD）和甲氧芐氨嘧啶（TMP）。采用亞硝酸鈉法測定

 該品中 SMZ、SD 的磺胺總量和提取分光光度測定 TMP 的含量，操作較繁。姚桂棣等

用系數倍率法，并借助微機，可不經分離直接測定各自的含量^[9^]。

分別配制成 SMZ、SD 的乙醇溶液 10ug/ml 和 TMP 的乙醇溶液 4ug/ml 作對照液。然

后配制模擬樣品溶液：準確稱取 SD、SMZ10mg，放入 100ml 容量瓶中，加 TMP 乙醇對照

溶液 20ml，用乙醇稀至刻度，取此液中 0.1mol/1HCl 稀釋 10 倍，然后，以 0.1mol/1HCl 為

參比，對上述對照液和模擬樣品液，以⊿λ0.5nm 間隔，從 300－220nm 掃描，求得吸光度值，

經微機處理選出測點：SMZλ₂4₃/λ₂6₅，K＝2.267；SDλ₂3₆/λ₂4₂，K＝1.5381；TMPλ₂40.₅/λ₂5₀，

K＝1.1291。以⊿A＝A₁－KA₂ 為縱坐標，λ 為橫坐標作圖（見圖 15）。當以 236nm 為測定波

長，則⊿A 只與 SD 濃度有關，可測定之。同理可測定 SMZ 和 TMP。增效聯磺膠囊同樣配

成乙醇溶液，將樣品液和對照液在 λ₂3₆/λ₂4₂、λ₂4₃/λ₂6₅、λ₂40.₅/λ₂5₀ 處測其吸光度值，并計算各

組分含量。

紫外可見近紅外分光光度計系數倍率法