非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2；Vero-HCV-E2說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2；Vero-HCV-E2說明書
形態(tài)特性  上皮樣細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性  Vero-HCV-E2細胞整合有丙型肝炎病毒的E2基因，能穩(wěn)定表達E2蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C40
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

棲土曲霉 Aspergillus terricola
靈芝 Ganoderma lucidium
Poly-L-Lysine Solutiona(5mg/ml)規(guī)格：1ml
大鼠氣管和支氣管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus
HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細胞
蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki
香菇 Lentinula edodes
人子宮平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
人胎盤絨毛膜細胞*培養(yǎng)基100mL
根霉屬 Rhizopus sp.
假單孢菌 Pseudomonas sp.
H4-IIE(大鼠肝細胞 )5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
雪白根霉
人腎透細胞腺細胞英文名稱：786-0
WM451, 人黑色素瘤細胞
嗜熱側(cè)孢(霉) Sporotrichum thermophile
香菇 Lentinula edodes
CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞)5×106cells/瓶×2100 次     谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒    
酸性磷酸酶    CAS9001-77-8    1g
SDS 溶液 ,10%，電泳    100881-100    100mL
土壤 RNAout    90704-50    50 次
10×100μL    NMY51 酵母感受態(tài)細胞    
100mg    5-Carboxyfluorescein    
100mg    5(6)-CFDA    
100mL    RNase-free 鹽酸胍溶液 ,8M    
5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester    22-0040-10    10mg
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝長尖 )    17-009-96    96 支
1張    PVDF 膜，0.45μm，13×20cm    
5mg    Brefeldin A( 蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑 )    
1g    PDTC(NF-κB 抑制劑 / 抗氧化劑 )    
2mL    谷胱甘肽瓊脂糖    
PMA/TPA (PKC 激活劑 )    23-0620-1    1mg
百萬堿基真 DNAout    130942-10    10 次
500U    RNase 抑制劑 ( 豬源 )    
1000mL    超快蛋白銀染試劑盒    
50 次    真 DNAout    
10mL    紅溶液 ,100mg/mL    
ADP/ATP 發(fā)光法細胞活力檢測試劑盒    130802-200    200 次
DNA  75% 乙醇    90406-250    250mL
20 次    Southern DNA Marker(DIG)