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①．從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
②．設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
③．樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
④．除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
⑤．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次 （也可用洗板機洗板）。
⑥．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
⑦．每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
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