您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
DNA快速脫保護(hù)劑儀器使用方案討論
全自動(dòng)寡核苷酸合成的脫保護(hù)步驟對(duì)合成時(shí)間和產(chǎn)品質(zhì)量非常重要。為了提高合成速度、純度和產(chǎn)率，我們經(jīng)常使用如下幾種快速脫保護(hù)試劑。
1. 用dC（ac）代替dC（bz） —— Beckman 認(rèn)證方法
Acetyl-protected phosphoramidtes的特征：
- 超速脫保護(hù)（65℃時(shí)10 min）
- 寡核苷酸合成中是關(guān)鍵成分
- 工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
- 使用AMA方法時(shí)不變化
- 純度與操作非常相關(guān)
- 在認(rèn)證的ISO 9001質(zhì)量系統(tǒng)下操作
2. TAC試劑
在溫和條件下，用含TAC保護(hù)基代替標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基可使脫保護(hù)反應(yīng)加速（在溫和條件下），適用于含有base-labile單體的寡核苷酸。
TAC的特征：
- TAC基團(tuán)的脫保護(hù)速度很快，在有濃氨條件下，55℃ 15min或在室溫中2 h。
- 與AMA脫保護(hù)試劑兼容（AMA是一個(gè)混合物，含有大于25%的氨溶液和40%的jia胺）
- 在乙腈中易溶。不需要加入混合溶劑，如二甲基甲酰胺或二氯甲烷。
- 適用于含有活潑基的低聚體合成，如燃料和修飾物。
- DNA合成中不變化是必要的條件，除快速脫保護(hù)試劑Cap A代替Cap A。
- 應(yīng)用dA(tac)可以提高寡核苷酸的質(zhì)量.
3. dG（dmf）方法
改變二甲基jia胺（dmf）dG的保護(hù)基可以加速合成高純度、高產(chǎn)率的寡核苷酸。因此也提高了高通量的產(chǎn)量。
dG的特征
- dG（dmf）脫保護(hù)的速度比傳統(tǒng)dG（ib）快，在濃氨中脫保護(hù)的時(shí)間是55℃ 2 h，65℃ 1 h。
- dG (dmf)-單體適用于G多的序列；與傳統(tǒng)的dG（ib）比較，未脫保護(hù)率被極大地降低了。
- dG (dmf)-amidite在溶液中與dA（bz）、dC（bz）、dT一樣穩(wěn)定。
- dG（dmf）amidite可以直接替代dG (ib)-amidite
- 在DNA合成中沒(méi)有改變是必須的條件，除有低濃度的iocline oxidizer，如0.02 Miocline， 存在。
4. 替代dC保護(hù)基
改變TAC dC的保護(hù)基可以加速合成高純度、高產(chǎn)率的寡核苷酸。用dC (tac)代替dC (bz)可以加快AMA脫保護(hù)的速度，提供高通量寡核苷酸的合成。
dC的特征
- 用AMA脫保護(hù)可以加速，*脫保護(hù)需要10 min，在65℃條件下。
- C-單體的副反應(yīng)通過(guò)轉(zhuǎn)氨作用被消除。
- 對(duì)一些修飾過(guò)的核苷酸都可用。
- dC (tac)-amidite可以直接替代dC (bz)-amidite。
- 用乙腈溶解amidite， DNA合成不改變。在標(biāo)準(zhǔn)醋酐的capping試劑中可以用。
DNA快速脫保護(hù)基反應(yīng)器是為有效制備生物樣品而設(shè)計(jì)的，用于PCR引物、探針和組分生產(chǎn)，DNA測(cè)序、DNA和RNA合成、隨機(jī)啟動(dòng)、載體設(shè)計(jì)、DNA指紋和人工基因合成。是DNA/RNA/寡核苷酸脫保護(hù)基快捷穩(wěn)定的解決方案。反應(yīng)可直接在96位樣品架上進(jìn)行，如“深井”板。6-10個(gè)樣品架可用于10升壓力反應(yīng)器。因此，操作工作量大大縮短。樣品被填充不同的板，例如帶有過(guò)濾底座、特殊蓋等，通過(guò)設(shè)計(jì)的電動(dòng)升降系統(tǒng)，在反應(yīng)中和反應(yīng)后自動(dòng)移出壓力容器進(jìn)行干燥。在開(kāi)啟和關(guān)閉過(guò)程中，會(huì)抽走腐蝕性反應(yīng)氣體，確保實(shí)驗(yàn)室人員的*安全。與樣品的反應(yīng)發(fā)生在氣相的壓力和微波效應(yīng)下。高氣相濃度會(huì)在幾分鐘內(nèi)引起*均勻的反應(yīng)。在系統(tǒng)中，所有操作參數(shù)均一直根據(jù)程序條件進(jìn)行控制，并以圖形方式記錄和存儲(chǔ)以進(jìn)行質(zhì)量控制。在整個(gè)過(guò)程中，液體試劑以及氣相中的壓力和溫度是被控制的。這確保了樣品的完整、可重復(fù)和均勻反應(yīng)，以便隨后分離出選擇性DNA序列。*的10升反應(yīng)器容量為*的樣品吞吐量提供了新的可能性。
DNA快速脫保護(hù)基反應(yīng)器應(yīng)用：
食品工業(yè)
研究機(jī)構(gòu)
大學(xué)
分子生物學(xué)
遺傳學(xué)
合成生物學(xué)
醫(yī)學(xué)
寡核苷酸脫保護(hù)基微波高壓反應(yīng)器特點(diǎn)：
反應(yīng)器容量：10升容量
樣品數(shù)量：6至10個(gè)，每個(gè)樣品有96位。
溫度范圍:*200°C
功率輸出：1200瓦
符合CE標(biāo)志
保修12個(gè)月
電源：220 V至240 V/50/60 Hz
*功耗：2500瓦
顯示屏：彩色觸摸屏
尺寸:W x D x H 52 x 73 x 123厘米（無(wú)終端）
重量：180公斤