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DNA合成儀原理

閱讀:1710        發布時間:2019-6-8

DNA的固相合成。
即DNA3'端固定于基質上,然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應用DNA聚合酶DNA合成。

合成過程
個堿基的3‘末端固定在樹脂上,下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用苯甲酸保護,然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
1。1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯,
2。然后用碘氧化成磷酸三酯
3。加入CHCl2COOH除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT
循環進行加入下一個堿基
 

合成完畢后
1。用苯硫酚除去5’-OH上的保護劑DMT
2。用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開,洗脫
3。用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑
4。除去氫氧化銨,真空抽干
5。液相色譜或者PAGE,回收片段長的。

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