內(nèi)毒素污染

內(nèi)毒素，又稱脂多糖（LPS），是革蘭氏陰性細(xì)菌的主要細(xì)胞壁成份。內(nèi)毒素的來源包括培養(yǎng)基、血清、水、緩沖溶液和其他細(xì)胞培養(yǎng)試劑，如胰蛋白酶。內(nèi)毒素是體內(nèi)外炎癥反應(yīng)的有效誘導(dǎo)劑。內(nèi)毒素污染是細(xì)胞培養(yǎng)和生產(chǎn)注射藥物中的主要問題。溶液和試劑可能是無菌但仍含有細(xì)菌成分，因此監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)試劑中是否存在內(nèi)毒素至關(guān)重要。

注意：“內(nèi)毒素"有時(shí)候用于描述細(xì)菌其他組成部分（如鞭毛蛋白），但在細(xì)菌學(xué)中它僅指脂多糖。

LPS的基本結(jié)構(gòu)

常見的內(nèi)毒素污染源？

水 — 使用高純度水制備培養(yǎng)基和溶液，清潔玻璃器皿。

玻璃器皿 — 為了消除內(nèi)毒素，必須將玻璃器皿加熱至250°C維持≥30分鐘，或加熱到180°C維持 3 小時(shí)1。

培養(yǎng)液、血清和添加劑 — 使用前要求制造商提供內(nèi)毒素水平認(rèn)證或測(cè)試。

塑料容器 — 要求制造商提供內(nèi)毒素水平和無致熱源的證明。

讓 InvivoGen 保障您的安全 ！所有InvivoGen的試劑都經(jīng)過徹-底測(cè)試，以確保不存在細(xì)菌污染，包括內(nèi)毒素。

我的實(shí)驗(yàn)有什么風(fēng)險(xiǎn)？

內(nèi)毒素在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均可引起顯著的不穩(wěn)定性。脂質(zhì)A部分能夠激活細(xì)胞表面或內(nèi)體的Toll樣受體4（TLR4），誘導(dǎo)MAP激酶（MAPK）、NF-κB和IRF（干擾素調(diào)節(jié)因子）通路的激活。盡管內(nèi)毒素的作用隨濃度和細(xì)胞類型的不同而改變，但它們確實(shí)可以改變細(xì)胞形態(tài)、影響增殖和轉(zhuǎn)染效率。此外，LPS還誘導(dǎo)了炎性細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18的產(chǎn)生，并激活caspase 4/5/11-NLRP3 非經(jīng)典炎癥小體，導(dǎo)致細(xì)胞焦亡。

在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，低內(nèi)毒素濃度可刺激免疫系統(tǒng)，而高濃度可引起發(fā)燒、低血壓、多器官衰竭，甚至死亡。

內(nèi)毒素在體內(nèi)外的主要影響

1.?Gorbet MB. & Sefton MV., 2005., 2.?Leider, R. et al. 2013., 3.?Nims, RW. & Price PJ. 2017., 4.?Rathinam VAK. et al., 2019

生物試劑內(nèi)毒素檢測(cè)

HEK-Blue™ LPS 檢測(cè)試劑盒 2

基于細(xì)胞的比色法分析

• 用途廣泛：適用于幾乎所有的生物試劑

• 高靈敏度：檢測(cè)限為0.01 EU/ml

• 經(jīng)濟(jì)實(shí)惠：1個(gè)試劑盒最多可進(jìn)行500次測(cè)試

HEK-Blue™ LPS 檢測(cè)試劑盒2的原理

試劑盒依賴于InvivoGen專有的HEK-Blue™-4細(xì)胞，該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)人源TLR4和一個(gè)NF-κB誘導(dǎo)的分泌型胚胎堿性磷酸酶（SEAP）報(bào)告基因。

簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)程序使該試劑盒成為常規(guī)測(cè)試的理想選擇。只要樣品中含有微量的LPS，在與HEK-Blue™-4細(xì)胞孵育過夜后，會(huì)導(dǎo)致NF-κB的激活和SEAP報(bào)告基因的表達(dá)。培養(yǎng)上清液中的SEAP活性通過加上底物QUANTI-Blue™溶液，并使用分光光度計(jì)在620-655 nm的波長(zhǎng)測(cè)量。吸光度與內(nèi)毒素含量成正比。使用試劑盒中提供的HEK-Blue™內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)系列稀釋獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線從而計(jì)算內(nèi)毒素濃度（大腸桿菌055:B5 LPS的制備參照FDA批準(zhǔn)的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）制備標(biāo)準(zhǔn)）。HEK-Blue™ LPS檢測(cè)試劑盒2 在InvivoGen公司內(nèi)部用作常規(guī)檢測(cè)。

使用該試劑盒的5大原因

1.替代昂貴而耗時(shí)的鱟試劑（LAL）。

購(gòu)買此套件一次，凍存HEK-Blue™-4細(xì)胞，以后只需重新訂購(gòu)其他耗材。

2.與LAL分析不同，如果樣品含有(1,3)-β-D-葡聚糖，使用HEK-Blue™-4細(xì)胞進(jìn)行LPS檢測(cè)不會(huì)導(dǎo)致假陽性。

3.適用于所有生物樣品，包括培養(yǎng)基、血清、化學(xué)制劑和疫苗佐劑。

4.溶液顏色從粉紅色變?yōu)樽?藍(lán)色表示 陽性反應(yīng)，結(jié)果簡(jiǎn)單可視。

5.包括一本實(shí)驗(yàn)程序小冊(cè)子，計(jì)算內(nèi)毒素濃度的方法，以及疑難排解部分。

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