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賽默飛液相色譜儀常用的4類檢測器介紹
賽默飛液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?，F(xiàn)代賽默飛液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。對高沸點(diǎn)、難氣化合物的混合物通過色譜柱核淋洗劑并以實現(xiàn)分離。應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。
檢測器是賽默飛液相色譜儀的重要組成部分，液相色譜檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。
1、紫外吸收檢測器：是目前HPLC應(yīng)用十分廣泛的檢測器。其工作原理是朗伯-比爾定律。這種檢測器靈敏度高，線性范圍寬，對流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測要求被檢測樣品組分有紫外-可見光吸收，而使用的流動相無吸收，或在被測組分吸收波長處無吸收。一般選擇在欲分析物有最大吸收的波長處進(jìn)行檢測，以獲得最大靈敏度和抗干擾能力。在沒有最大吸收時，可采用末端吸收。檢測波長的選擇除取決于待測物質(zhì)的成分和分子結(jié)構(gòu)外，還必須考慮流動相組成、共存組分干擾等因素。特別是各種溶劑都有一定的透過波長下限值，超過這個波長，溶劑的吸收會變得很強(qiáng)，以至于不能很好地測出待測物質(zhì)的吸收強(qiáng)度。下表列出了HPLC中一些常用的溶劑透過波長的下限。
2、熒光檢測器：是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測器的原理與熒光分析法相同，化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光，稱為熒光或發(fā)射光。許多藥物和生命活性物質(zhì)具有天然熒光,能直接檢測，某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，然后進(jìn)行熒光檢測。其最小檢測濃度可達(dá)0.1ng/mL，適用于痕量分析。一般情況下，熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測器增強(qiáng)了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
3、示差折光檢測器：是一種通用的濃度檢測器，對所有溶質(zhì)都有響應(yīng)。某些不能用選擇性檢測器檢測的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測器檢測。示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高。在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。
4、化學(xué)發(fā)光檢測器：是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，具有設(shè)備簡單、價格低廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號變成電信號，就可進(jìn)行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達(dá)10～12g。