費氏弧菌發光桿菌真空冷凍干燥法
將微生物冷凍,在減壓下利用升華作用除去水分,使細胞的生理活動趨于停止,從而長期維持存活狀態。 操作步驟如下:好氧菌冷凍干燥管的制備
1 安瓿管準備 安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標簽,標上菌號及時間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
2 保護劑的選擇和準備 保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時,應注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
3 凍干樣品的準備 在zui適宜的培養條件下將細胞培養至靜止期或成熟期,進行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規程》(試行)),與保護劑混合均勻,分裝。微生物培養物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長的毛細滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個球部。若是液體培養的微生物,應離心去除培養基,然后將培養物與保護劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝
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