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小鼠腎足細胞系(株)傳代基本技術

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Mouse podocyte 小鼠腎足細胞系(株)傳代基本技術
1.選用細胞生長狀態好(80-90%)的細胞進行傳代。
2.吸除細胞培養液。用含雙抗的1×PBS(pH7.4)清洗細胞培養
瓶2次。加入1ml 消化液至細胞培養瓶,輕輕搖動,使細胞消化
液剛剛覆蓋細胞表面。注:消化液配比為:0.25%胰蛋白酶+
0.02%EDTA。
3.將細胞培養瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養箱靜置培養數
分鐘后,在顯微鏡下觀察細胞的消化狀態。注意:若貼壁細胞逐
漸趨于圓形或部分懸浮后,即可用手指輕輕拍打細胞培養瓶側部
或底部使大部分貼壁細胞脫落,之后立即加入細胞終止液,終止
細胞消化。每種細胞的消化時間有差異,消化時注意觀察,不要
消化太久。
4.吹打培養瓶中懸浮細胞若干次,吸出細胞懸浮液,轉入15ml
離心管中,800rpm 離心5分鐘。
5.棄離心管中上清液,加入細胞培養液重懸細胞。細胞計數,確
定細胞數量。
6.細胞分瓶后,加入適量細胞培養液至細胞培養瓶中,置于
5%CO2、95%空氣、37℃培養箱靜置培養24小時。

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