小鼠白介素4(IL4)小鼠白介素5(IL5)ELISA試劑盒測定錯誤結果的原因分析

ELISA即酶聯免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall 和Perlmann于1971年zui先應用該法進行了IgG定量測定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯結成酶標抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，zui后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

小鼠白介素4(IL4)小鼠白介素5(IL5)ELISA試劑盒添加回收的幾種誤區：

    呋喃類代謝物提取過程通常分三個關鍵步驟：

 水解-----衍生化-----提取

 (1)采用標準曲線的zui大標準濃度進行添加回收。如德國拜發和我公司AOZ試劑盒中的第6個標準點4.05ppb，AMOZ試劑盒中的第6個標準點8.1ppb。因為這些標準品是已經過衍生化后的標準品，不能代表樣本前處理實驗中的加酸水解和加衍生化試劑衍生這兩個步驟，所以就算回收率很高，但失去了實際參考價值。

 （2）*依賴未衍生的代謝物標準品進行添加回收。因部分未衍生的代謝物在配制成標準品后有一定的有效期，會存在潛在的不穩定因素，而且添加回收僅能考證衍生化和提取兩個關鍵點，不能驗證從組織蛋白中水解呋喃類代謝物的過程，因此也有一定的局限性。

 的評價方案：采用經LC-MS-MS確證的陰陽性樣品，留作質控樣品，對檢測的樣本和試劑盒進行質量評價。這也是實驗室所出數據可信度說服力的關鍵點。

加樣

 在小鼠白介素4(IL4)小鼠白介素5(IL5)ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。

  加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。

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