關鍵詞:真菌18S rDNA/ITS菌種鑒定|實驗技術服務
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真菌18S rDNA/ITS菌種鑒定|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
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測序實驗流程:
1. 菌落形態觀察
觀察菌落的大小、形狀、隆起度、邊緣、表面性狀、顏色與透明度、質地和干濕度。
2. 革蘭氏染色
按照革蘭氏染色方法進行制片、初染、媒染、脫色、復染、干燥、鏡檢;干燥后,用油鏡觀察。
3. 鞭毛染色
挑取18~30 h新鮮平板培養物制備菌懸液,制片,室溫自然干燥。滴加硝酸銀染色A液覆蓋3~5 min,用蒸餾水充分洗去A液,再滴加B液染色約1 min,當涂面出現明顯褐色時,立即用蒸餾水沖洗。自然干燥后用油鏡觀察。菌體呈深褐色,鞭毛顯褐色。
4. 糖類分解試驗
將被檢菌接種于糖發酵培養基中,37℃培養2-3天。如果培養基變黃,說明產酸;如變黃的同時,還有氣泡,說明既產酸又產氣。培養基仍呈藍色,說明未產酸。選取木糖、葡萄糖、半乳糖和蔗糖。
5. 吲哚(靛基質)試驗
將待檢菌種接種于鄧享氏蛋白質的胨溶液中,37℃培養1-2天。于培養液中加入戊醇或二甲苯2-3ml,搖勻,靜置片刻后,沿管壁加入試劑2ml,如出現紅色沉淀,表示為陽性。
6. 淀粉水解試驗
將LB瓊脂加熱融化,使冷到50℃,加入淀粉溶液,混勻后,傾注平板。將細菌劃線接種于平板上,37℃培養24小時,生長后取出,在菌落處滴加革蘭氏碘液少許,培養基呈深藍色,能水許解淀粉的細菌菌落周圍有透明環。
9. V-P試驗
將被檢菌接種于試驗培養基中(葡萄糖、K2 HPO4、蛋白胨各5g,溶于1 000ml水中,分裝于試管中,0.075MPa滅菌10分鐘),培養2-7天后,于培養物中加入1ml 10%的NaOH,混勻,再加入3-4滴2%氯化鐵溶液。數小時后,培養基表面的下層出現紅色者,為陽性。
10.甲基紅(M.R)試驗
接種細菌,于37℃培養2-7天后,于培養物中加入幾滴甲基紅酒精溶液(0.1g甲基經溶于300ml 95%乙醇中,加蒸餾水至500 ml),如呈紅色,表示陽性。
11. 檸檬酸鹽利用試驗
將被檢菌接種到Simmons固體檸檬酸鹽培養基上,37℃下培養2-4天,能利用檸檬酸鹽的細菌表現為有細菌生長,培養基變為藍色,不能利用檸檬酸鹽的細菌不生長,培養基不變色。
12. 硝酸鹽還原試驗
將被檢細菌接種于硝酸鹽培養基中,37℃培養1-2天,每管中先加入甲試劑0.1ml,再加乙試劑數滴,如出現紅色,表示陽性。
13. 接觸酶試驗
將1ml 3%的H2O2傾注于生長物(菌落或菌苔)上,有氣泡(O2)發生者為陽性。也可于清潔小試管中加少量H2O2(30%),再用清潔無菌的細玻棒(或火焰封口的毛細管或鎳鉻做成的接種環)醮細菌少許,插入H2O2液面下,有氣泡者為陽性。也可在玻片上滴一滴H2O2 蘸取少許培養物,混合,有氣泡者為陽性。
14.16srDNA分析
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