制備型高效液相色譜儀通常都被認為和大容量色譜柱和高流速有關聯的。然而并不是以設備的大小和系統消耗的流動相的多少來決定制備高效液相色譜，而是依據分離目的來決定。與分析液相不同，制備液相的目的是對產品的單體進行提取和純化。關于制備液相小析姐今天要跟你聊一下，快準備好你的小本本吧。

與傳統的純化方法（如蒸餾、萃?。┍容^，制備液相是一種更有效的分離方法，因此被廣泛應用在樣品和產品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和制藥等領域對高純度組份的需求不斷增加，制備型液相色譜儀應用的領域也在迅速的擴大發展。

制備液相與分析液相的區別

和制備液相對應的，是分析液相。它們的最大差別，不在于外形，而在于目的。分析液相的目的當然是為了分析樣品，有什么成分，含量多少，也叫做定性定量。要做好分析液相，最關注的是分離度和靈敏度，要分得開，測得到，測得準。而制備液相是利用色譜柱的分離能力，來去除雜質，得到高純樣品。為什么強調純度呢？
在實驗室里，紅外、紫外、核磁這些儀器，都要求樣品達到足夠的純度，才能得到準確的結果。除了實驗室，藥品的生產也需要純化，特別是生物制品和藥劑。很多生物制品如果是直接吃下去，跟吃個雞蛋也沒什么不同，直接注射才能保留活性成份。而注射治療，藥物會直接進入血液，所以純度非常重要。在實驗室里，用于制備的液相，配置和普通的分析液相差不多。有泵，有進樣器，有柱子，有檢測器。為了收集分離出來的化合物，制備液相通常還配一個餾分收集器。餾分收集器就像液相色譜的收納盒，把每次分析的同類物質收納到一起。餾分收集器可以直接串聯在檢測器后面。也可以連接一個三通，和檢測器并聯，都接在色譜柱的后面。有些實驗室里需要收集的量很大，一個餾分收集器裝不完，還可以并聯好幾個。根據檢測器的信號顯示，當化合物出峰的時候，儀器會自動收集。一般按照時間編程，也可以根據檢測器的信號強度自動觸發。一個個化合物通過餾分收集器收集到小瓶或者試管里，也可以通過管路連接到更大的瓶子。
制備液相有很多種分類方法，比如按壓力分類，或者按產量分類，彼此之間有交叉，沒有明確的標準。不同類型的制備液相有著不同的特點。比如這根用在生產上的制備液相柱，模樣和實驗室里有些不同。僅僅內徑就有1.6m，色譜柱的重量有36噸重，每天消耗的流動相能放滿半個小游泳池。除了特別大的，還有特別小的。比如微克級制備，也常被稱為微量制備，它的有趣之處在于微量餾分收集器，可以直接使用MALDI點樣板。

制備色譜柱的材質及其特點

各種規格的玻璃柱子在實驗室里頭很容易得到，而且價格低廉，但玻璃柱子致命的弱點是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎。當由于壓力太小而導致流動相流速很慢的時候，高位液面或加高壓空氣（或者氮氣）的采用是一個簡單的解決辦法。在底下加真空，也能在一定程度上解決這個問題。
不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，但其價格相對很貴。如果，只有很小的分離項目且經費也允許，選擇市面上直徑為1cm的小型制備柱。有機玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運行狀態，對有色的物質其特點就更為突出。

裝柱方法的選擇

根據固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關系很大，顆粒度的減少會導致裝柱的難度。一般來說，顆粒直徑小于20－30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊－裝填"技術適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀松的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成。然而，當柱直徑大于20mm，所加壓力為30－40bar時，高壓懸漿裝填技術就變得十分復雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長壓縮技術。這種方法，先將固定相懸漿（或偶爾是干填充物）裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設備，在柱子填完后，應用有柱效的測量，對柱效低的柱子應該重填。

流動相的選擇

除了和分析色譜同樣的考慮外，在選用流動相時，要考慮色譜分離后面加有旋轉蒸發等二次分離操作。一般來說，不宜采用高毒性溶劑，對多元溶劑要盡可能的少用。如果產品中含有大量溶劑，溶劑的純度也要考慮在其中。

組分保留時間的估計

用分析柱子在同等色譜條件下（同樣的固定相和流動相）測定保留時間后，按照單一組分的線流速（不是體積流速）一定，通過計算可以知道組分的大致保留時間區域。分析譜圖的峰形狀，對確定保留時間也有很大的參考價值。

產品的收集

手工餾分收集費時費力，自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。

超載、邊緣切割、中心切割、放大技術與非線性效用

在制備色譜中，因為沒有必要達到分析色譜那樣的分離度，可以在一定范圍內大大加大進樣的濃度和體積。在做分離的時候，也有一些分析色譜的時候，不能用到的技巧。因為篇幅關系，不在這里敘述。

柱轉換技術

通過接頭或者閥門，實現柱子的簡單延長，或者比較方便地實現對其中一個（或幾個）組分的精制。

新制備技術

模擬移動床可以連續進樣，并可以利用邊緣切割效用，而且采用了柱切換技術，能更好的利用溶劑和填料，已經應用于工業化生產。其理論和技術也日益完善。迎頭色譜、超臨界流體色譜、逆流色譜環形色譜、氣相制備色譜等在科研和工業生產中也得到了應用。