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Illumina MS-102-3003(MiSeq Reagent Kit v3) 是專為Illumina MiSeq測序平臺設計的高性能測序試劑盒,采用邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis, SBS)技術,支持長達600個循環的測序反應,單次運行可生成高達15 Gb的數據輸出,適用于全基因組重測序、轉錄組分析、宏基因組學及靶向測序等應用場景。
測序循環數:600次(支持150次循環格式用于計數應用)
數據輸出:最大15 Gb(600循環)或3.8 Gb(150循環)
讀長:雙端測序(Paired-End)支持2×300 bp
讀數數量:單次運行最多可生成2500萬條序列
系統兼容性:適用于研究模式下的MiSeqDx、MiSeq FGx及標準MiSeq系統
SBS技術通過以下步驟實現測序:
堿基延伸:DNA聚合酶催化dNTP(脫氧核苷酸)與模板鏈互補配對。
熒光激發與信號收集:每個dNTP攜帶可逆終止基團及熒光標記,經激光激發后發射特定波長熒光,信號由光學系統捕捉。
終止基團切除:熒光信號收集后,化學試劑切除終止基團,恢復鏈延伸能力。
循環重復:上述步驟循環進行,直至完成測序長度。
試劑盒改進:
優化化學配方提升簇密度和片段長度,Q30得分(質量值≥30的堿基比例)顯著提高。
即用型預裝試劑盒設計,減少人為操作誤差。
優勢:
高通量:單次運行生成15 Gb數據,支持大規模基因組研究。
長讀長:2×300 bp讀長提升復雜基因組區域解析能力。
高質量:改進試劑配方提升測序準確性(Q30得分)。
兼容性強:適配多種MiSeq測序系統,研究模式靈活。
試劑儲存:試劑盒需在-20℃保存,解凍后避免反復凍融。
文庫質量:確保文庫片段分布均勻,避免小片段(<100 bp)過量導致測序失敗。
上機濃度:初始建議使用4 pM,過高濃度可能導致簇密度過高而信號飽和。
設備維護:測序前需檢查儀器狀態,避免因硬件故障導致數據丟失。