要完全實現(xiàn)UHPLC色譜柱的更高柱效，就必須讓液相系統(tǒng)的擴散效應對色譜柱的影響盡可能小。小顆粒色譜柱，會讓色譜峰更窄更尖銳，提高分離度；但是，更窄的色譜峰，對柱外擴散體積更為敏感。因此，根據(jù)系統(tǒng)的擴散體積，匹配合適的色譜柱規(guī)格，對于實現(xiàn)分離性能至關(guān)重要。

如何選擇合適的亞三微米色譜柱？

根據(jù)如下四步驟加以考慮：

色譜填料/鍵合相的選擇性與耐受性：滿足目標應用的需要；

色譜柱長與粒徑的比值L/dp：色譜柱的柱效水平是否滿足目標應用的分離度需求；

柱長L與粒徑dp對柱壓的影響：考慮色譜柱運行柱壓，是否能兼容您的液相系統(tǒng)；

色譜柱內(nèi)徑：對于擴散體積較大的系統(tǒng)，選擇4.6 mm內(nèi)徑，可以減少系統(tǒng)對柱效的影響程度。

色譜柱規(guī)格選擇指導

系統(tǒng)	HPLC	UHPLC	UPLC
擴散體積測量值	>40μL	22-29μL	<20μL
常規(guī)操作壓力	<4000 psi	<10,000 psi	<18,000 psi
色譜柱粒徑	3-5μm	2-3μm	<2μm
色譜柱內(nèi)徑	4.6 mm (3.0 mm)	3.0mm (2.1mm)	2.1mm (1.0 mm)
色譜柱長度	75-250mm	50-100mm	≤150mm

以上根據(jù)Waters LC系統(tǒng)來推薦色譜柱規(guī)格。

對任何LC系統(tǒng)都適用的柱規(guī)格

在轉(zhuǎn)移LC方法時，儀器譜帶展寬是需要確定的十分關(guān)鍵的LC儀器參數(shù)之一。了解譜帶展寬，能幫助色譜分離化學家所開發(fā)的方法，兼容任何一臺LC系統(tǒng)。如下色譜柱規(guī)格表，基于儀器譜帶展寬名義測量值。

系統(tǒng)	LC技術(shù)	譜帶展寬*	推薦色譜柱的粒徑與內(nèi)徑
Shimadzu Prominence UFLC	HPLC	41μL	XBridge 3.5, 5μm; XSelect 3.5, 5 μm; CORTECS 2.7 μm 3.0–4.6 mm I.D.
Alliance 2695 HPLC	HPLC	29 μL
Agilent 1260 UHPLC (600 bar)	HPLC	28 pL
Thermo Accela UHPLC	HPLC	21μL	XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm; CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D.
Agilent 1290 UHPLC (1200 bar)	UHPLC	17 μL
ACQUITY Arc	UHPLC	23 μL	XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm; ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm, CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D.
ACQUITYUPLC	UHPLC	12 μL	ACQUITY UPLC BEH 1.7 μm; ACQUITY UPLC CSH 1.7 μm; ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm, CORTECS 1.6 μm 2.1 mm I.D.
ACQUITY UPLC H-Class W/Column Manager	UPLC	12 μL
ACQUITY UPLC H-Class	UPLC	9μL

*這些測量數(shù)值基于未經(jīng)調(diào)整的儀器，僅作為參考。對于系統(tǒng)的泵、管路連接、以及儀器參數(shù)的任何調(diào)整，都會改變該儀器的譜帶展寬。

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如何選擇合適的亞三微米色譜柱

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