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所有產品僅供科研使用，不能用于食用和醫療等

人腸道病毒71型IgG抗體（EV71-IgG） elisa試劑盒
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：96 T 
0.5ng/mL  - 12ng/mL 
使用目的：
本試劑盒用于測定科研血清、血漿及相關液體樣本中腸道病毒 71型IgG 抗體（EV71-IgG ）
含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人腸道病毒 71型IgG 抗體（EV71-IgG ）水平。
用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入腸道病毒 71型IgG
抗體（EV71-IgG ），再與HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*
洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui
終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腸道病毒 71 型IgG 抗體（EV71-IgG ）呈正相關。用酶標
儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人腸道病毒 71型IgG 抗
體（EV71-IgG ）濃度。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  標準品（24ng/mL）  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12孔×8 條  9  標準品稀釋液  1.5 ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張    
6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟
1.   標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
12ng/mL  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
6.0ng/mL  4 號標準品  150µl 的5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
3.0ng/mL  3 號標準品  150µl 的4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
1.5ng/mL  2 號標準品  150µl 的3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
0.75ng/mL  1 號標準品  150µl 的2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 
 2.   加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。  
7.   溫育：操作同 3。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.  測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。

人腸道病毒71型IgG抗體（EV71-IgG） elisa試劑盒                                                                                 操作程序總結： 
 計算
    以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。  
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值
大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月 
      

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