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產品說明:真核表達篩選用抗生素,可以用于篩選表達特定抗性基因的穩定細胞株。篩選哺乳動物細胞,推薦起始篩選濃度為400微克/毫升;篩選植物細胞,推薦起始篩選濃度為10微克/毫升;篩選酵母,推薦起始濃度為500微克/毫升。根據起始濃度的效果可以再適當升高或降低G-418的使用濃度。
分子式:C20H 40N4O10·2H2SO4
分子量:692.71
CAS#:108321-42-2
外觀:白色粉末
溶解性:可溶于水、甲醇、緩沖液和培養基。溶解后,0.22μm過濾除菌,分成小包裝,4℃可保存12個月,-20℃保存時間更長。zui常用的儲存液使用100mM HEPES(pH7.3)配制,濃度為50mg/ml。使用HEPES配制的好處是:加入儲存液不會改變培養體系的pH值。
儲存條件:2-8℃
G418溶液的配制
配的時候就是用配好的HEPES溶G418,然后過濾,不用高壓滅菌了,配好后分裝,-20度保存,用的時候取一管放4度。
ddH2O 490ml
Nacl
Na2HPO4-12H2O
Kcl
Glu
HEPES
用氫氧化鈉調PH至7.3 ,定容至500ml
G418貯存液(50mg/ml)的配制
以下為細胞篩選的常用步驟:僅僅作為參考
1.G418的配制:取
2.細胞培養:取待測培養細胞,制備成細胞懸液,按等量接種入多孔培養板中,培養6小時左右開始加藥。
3.制備篩選培養基:在100ug/ml~1000ug/ml范圍內確定幾個梯度,比如先做個100ug/ml、400ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml,按梯度濃度用培養基稀釋G418制成篩選培養基。
4.加G418篩選:吸除培養孔中培養基,PBS洗滌一次,每孔中加入不同濃度的篩選培養基。
5.換液:根據培養基的顏色和細胞生長情況,每3~5天更換一次篩選培養基。方法同4.
6.確定*篩選濃度:在篩選10~14天內能夠殺死所有細胞的zui小G418濃度即為*篩選濃度。在*輪就篩選出*G418濃度的可能性不大,zui有可能的是出現這種情況:用某一濃度G418的量在篩選14天后還不能殺死細胞,而用下一個梯度的 G418的量在10天前就看不到活細胞了。假如是400ug/ml不能殺死細胞,而800ug/ml在第5天就把所有細胞都殺死了,則可以再用500ug /ml、600ug/ml、700ug/ml進一步篩選,以確定*篩選濃度!心得:由于特性明確的細胞系G418的*用量還是比較穩定的,所以有時候不需要在這么大范圍內進行篩選。比如說你要轉染NIH3T3細胞,現在我告訴你我測試過NIH3T3細胞對G418的敏感性,我用的篩選濃度是200 ug/ml,這時你就可以做150ug/ml、200ug/ml、 300ug/ml三個濃度進行篩選。
通過預實驗確定了*篩選濃度后,就可以做穩定轉染了。
a 轉染:轉染后培養24小時或者更長,到細胞增長接近匯合時按1:4密度傳代,繼續培養,待細胞密度增至50%~70%匯合時;
b 加G418:去掉培養液,PBS洗一次,加入按*篩選濃度配制好的G418篩選培養基。
c 換液:根據培養基的顏色和細胞生長情況,每3~5天更換一次篩選培養基。當有大量細胞死亡時,可以把G418濃度減半維持篩選。 篩選10~14天后,可見有抗性的克隆出現,停藥培養,待其逐漸增大后;
d 挑單克隆:制備細胞懸液,細胞計數,用培養基稀釋細胞到1個/10ul。在96孔板中加入培養基150ul/孔,再加入細胞懸液10ul/孔。待其逐漸增大后轉入到48孔中增殖。
e 單克隆鑒定:細胞大量擴增后,提取總RNA,做RT-PCR檢測目的基因是否存在。
產品報價:
貨號 | 名稱 | 產地 | 規格 | 報價(元) | *(元) | 庫存 |
| G418 | Mpbio | | 2298 | 345 | 是 |
| G418 | Mpbio | | 5895 | 1450 | 是 |
99261ES03 | G418 | YEASEN | | 320 |
| 是 |
99261ES05 | G418 | YEASEN | | 1250 |
| 是 |
翌圣生物科技(上海)股份有限公司 - 主營產品: 抗體,小分子抑制劑,熒光染料,干細胞培養,血清
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