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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 4T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 41209ES04 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Milk) 乳液外泌體快速抽提試劑盒Plus | 41209ES04 | 4 T | 955.00 |
41209ES20 | 20 T | 4255.00 |
產品描述
Exosome（外泌體）是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質雙分子層結構；存在于細胞培養上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。
本試劑盒采用*的分離技術，可以快速從乳液中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細胞共培養、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應用。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
41209ES04 | 41209ES20 | ||
41209-A | Buffer-A | 10 mL | 50 mL |
41209-B | Buffer-B | 10 mL | 50 mL |
41209-C | Buffer-C | 10 mL | 50 mL |
41209-D | Buffer-D | 20 mL | 100 mL |
41209-E | 50 mL過濾柱 | 4個 | 20個 |
運輸和保存方法
室溫運輸，本試劑盒可于室溫穩定保存24個月。
注意事項
1、產品只針對乳液樣本，不適用其它血清/血液或者是細胞培養上清中外泌體的抽提；如果需要進行細胞上清外泌體分離，請選用細胞培養上清外泌體快速抽提試劑盒。
2、如果想要進一步純化外泌體，可以使用相應抗體包被的磁珠進行親和純化。
3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4、本產品僅作科研用途！
操作方法
樣品預處理：
1、收集新鮮的樣品，置于冰上待用；若為凍存的樣品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍，待*融化后置于冰上待用。
2、取25 mL（單次樣品最佳提取量為50 mL）乳液樣品轉移至離心管中，4℃，10000×g離心20 min，轉移分層樣品中的中層乳清至新的離心管中。（離心后樣品分為三層，上層為脂質層，中層為乳清層，下層為蛋白層。脂質層應致密、穩定，若脂質層松軟，不穩定，且蛋白層沉淀較多，可重復此步驟。）
3，向乳清中加入Buffer-A，顛倒混勻離心管至呈現半透明狀，再加入Buffer-B，顛倒混勻后2℃至8℃靜置10min。（靜置結束后搖晃離心管，樣品應呈現白色固體和透明液體混合物，若樣品仍為乳白色或是未呈現混合狀，可以適當加入Buffer-A至液體透明。）
乳清體積 | Buffer-A | Buffer-B |
20 mL | 2 mL | 1.5 mL |
40 mL | 4 mL | 3 mL |
【注】：試劑用量可根據此表進行等比例換算。
4，將樣品于4℃，10000×g離心10 min，收集上清液轉移至50 mL過濾柱中，4℃，3000×g離心2min。
5，收集過濾后的上清液至新的離心管中，加入和Buffer-B等量的Buffer-C顛倒混勻。
外泌體分離：
1、向預處理后的樣品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他樣品量根據表中試劑用量進行等比例變換）。
預處理樣品量 | Buffer-D |
20 mL | 5 mL |
40 mL | 10 mL |
【注】：試劑用量可根據此表進行等比例換算。
2、蓋緊離心管蓋，渦旋振蕩1 min，放置于4℃冰箱靜置2 h。
3、取出裝有混合液的離心管，4℃，10,000×g離心60 min，棄上清（盡可能吸凈上清液），收集富含外泌體的沉淀。
4、吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物，待其充分懸浮于PBS后，將懸液轉移至新的1.5 mL離心管中。
【注】加入1×PBS的量，建議根據預處理樣本的體積決定，預處理樣本體積：Exosome Buffer體積=40:1。
5、將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃，12,000×g離心5 min，棄沉淀，保留上清液，該上清液即富含外泌體顆粒的溶液。
【注】此時如果依然可以看到明顯的沉淀，建議重復步驟5，多次離心至無明顯沉淀。
6）外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天，分裝后于-80℃ 長期保存，避免反復凍融。
外泌體除菌（可選）：
獲得的外泌體后期需要與細胞共培養，可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時，外泌體濃度在10-100 μg/mL內做梯度摸索，選擇一個較為合適的條件。
HB220107
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