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Calcium Phosphate Cell Transfection Kit

磷酸鈣法細胞轉染試劑

產品信息

產品描述

磷酸鈣法轉染DNA是基于形成磷酸鈣-DNA沉淀的原理：磷酸鈣可促使細胞膜和DNA的結合，之后通過細胞內吞的作用將外源DNA轉入目的細胞。該方法曾被用于多種細胞系的轉染。翌圣生物的磷酸鈣法細胞轉染試劑是在傳統磷酸鈣法的基礎上經過特別優化，不僅在轉染效率有了較大提高，且降低了細胞毒性，特別適合于293或293T細胞的轉染，對其他大多數常見細胞如Hela、CHO也具有較好的轉染效果，不僅適用于細胞的瞬時轉染，且適用于穩轉株的篩選。

本品為無菌包裝，可直接使用。

產品組分

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20 ℃保存，有效期1年。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）高純度的質粒是獲得高轉染效率的必要條件，確保A260/A280＞1.8，且電泳檢測抽提到的質粒90%以上都是超螺旋。

3）在用磷酸鈣法轉染細胞時應使用濃度不高于5%的CO₂，CO₂的最佳濃度為3%左右。

4）BBS溶液的pH值直接關系到轉染效率，盡量避免把BBS溶液長時間暴露在空氣中，以免被空氣中的CO₂酸化。

5）轉染時由于質粒、細胞不同，最佳的質粒用量需自行摸索。

使用說明

1.  對于貼壁細胞（以6孔板為例）

① 轉染前一天（20-24 h），胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板，使其在轉染時密度為70-90%。

② 在轉染前30-60 min，吸去細胞培養液，加入新鮮的*培養液（不含抗生素）2 mL。

【注】：轉染時最好使用新鮮配制的培養液；轉染用的培養液可以在配制后分裝凍存，使用時再解凍。

③ 取2-6 µg待轉染的質粒DNA（質粒總體積不宜超過20 µL），加入到100 µL CaCl₂溶液中，充分混勻。

④ 把DNA- CaCl₂溶液加入到100 µLBBS溶液中，混勻，室溫孵育10-20 min。此時不會產生可見的沉淀。

【注】：該步驟順序不能反，需把DNA- CaCl₂溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA- CaCl₂溶液中。

⑤ 把DNA- CaCl₂-BBS混合物均勻滴加到整個6孔板內。5% CO₂，37℃培養細胞。

⑥ 根據實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16 h后輕輕晃動培養板數次以充分懸浮一些磷酸鈣沉淀，吸去含磷酸鈣沉淀的培養液，加入2 mL新鮮的*培養液，繼續培養。

⑦ 通常在轉染約24 h后就可以檢測到轉染基因的表達。

2.  對于懸浮細胞（以6孔板為例）

① 離心收集懸浮細胞，用PBS洗滌一次。

② 按照上面的步驟③和④制備DNA- CaCl₂-BBS混合物。

③ 每10⁶個細胞的沉淀，用100 µL DNA- CaCl₂-BBS混合物重新懸浮，室溫放置20 min。

④ 在一個6孔板孔內加入2 mL*培養液（不含抗生素），然后加入來自上一步的細胞-DNA- CaCl₂-BBS混合物，混勻。

⑤ 5% CO₂，37℃培養細胞。

⑥ 根據實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16 h后離心收集細胞，用PBS洗一次，然后用2 mL*培養液重新懸浮細胞，繼續培養。

⑦ 通常在轉染約24小時后就可以檢測到轉染基因的表達。

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