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超潔凈UCF.ME® Thermostable RNase H,精準切割,實驗更高效!

2025-3-7  閱讀(144)

分享:

E. coli RNase H(E. coli 核糖核酸酶 H)是一種能夠特異性降解RNA-DNA雜交鏈中RNA部分的酶,在DNA復制、修復和轉錄等過程中發揮重要作用。它通過切割RNA鏈,確保DNA模板的完整性和穩定性,因此在分子生物學實驗中被廣泛應用,例如cDNA合成、rRNA去除和RNA干擾研究。然而,RNase H 在使用過程中也存在一些缺陷:1)它可能對單鏈RNA或DNA產生非特異性切割,影響實驗結果的準確性;2)其熱穩定性較差,難以在高溫條件下保持活性,因此不適用于高溫逆轉錄、PCR等需要高溫環境的實驗。這些局限性促使研究人員開發熱穩定RNase H,以拓展其應用范圍并提高實驗效率。

 


圖1.RNase H作用機理

 

源自Thermus thermophilus的Thermostable RNase H(熱穩定核糖核酸酶H)是E. coli RNase H的同源物,在功能上表現出相似的核糖核酸內切酶特性。它能夠精準識別并高效切割 RNA:DNA雜交體中的RNA鏈磷酸二酯鍵,同時確保DNA鏈的完整性。通過對蛋白結構的深入分析發現,盡管T. thermophilus RNase H的整體穩定性分布與E. coli RNase H具有一定相似性,但前者在整體穩定性以及殘基局部穩定性方面均表現出顯著提升。Thermostable RNase H的最佳活性溫度在65℃以上,更高的反應溫度能夠顯著提升反應的特異性和效率,減少非特異性切割這一特性使其在分子生物學實驗中展現出廣泛的應用潛力,例如:

  • rRNA去除;

  • mRNA加帽率檢測;

  • 去除雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A);

  • cDNA第二鏈合成中去除mRNA;

  • 提升高溫逆轉錄、等溫擴增、PCR實驗的擴增效率。

 

圖2.Thermostable RNase H和E. coli RNase H三維結構圖[1]

 

Thermostable RNase H常用于病原菌檢測實驗中,如在宏基因組測序(mNGS)和病原靶向測序(tNGS)中常用于rRNA去除實驗,若分子酶中存在宿主或其他背景菌核酸殘留,可能會嚴重影響檢測結果的準確性。為此,翌圣生物基于UCF.ME®超潔凈工藝技術推出UCF.ME® Thermostable RNase H (Cat#14545),該產品由UCF.ME®超潔凈分子酶生產基地生產,從物料篩選到環境控制,從工藝優化到質量檢測,每一環節均經過嚴格把控,確保極低的背景菌gDNA殘留和核酸酶殘留,為實驗結果的準確性、可靠性和重復性提供了強有力的保障。

 

 

產品優勢

 
  • 活性強、批間一致性好;

  • 極低宿主 gDNA 殘留:<0.02 Copies/U;

  • 無核酸外切酶、切口酶、RNase 酶殘留;

  • 優異的穩定性:在4℃處理32天、25℃處理16天和37℃處理7天后,酶活性無明顯下降。

 
 
 

 

 

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產品名稱

貨號

規格

目錄價

活動價

UCF.ME® Thermostable RNase H

14545ES72

250 U

759元

0元

 

活動細則:

1、活動時間:2025年3月5日-2025年3月31日

2、活動名額有限,每位客戶限一套。

 

 

 

 

性能展示

 

翌圣UCF.ME®  Thermostable RNase H  (Cat#14545)

01

活性強、批間一致性好

使用3批次UCF.ME® Thermostable RNase H分別與RNA:DNA 底物進行孵育,并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實驗結果表明,翌圣0.05 U的UCF.ME® Thermostable RNase H能有效切割20 pmol RNA:DNA底物中的RNA,且批間一致性優異,展現了產品的高穩定性和可靠性。

 

圖3.UCF.ME® Thermostable RNase H活性檢測結果

注:反應條件:50℃ 20min;RNA:DNA底物-20 pmol

 

02

宿主gDNA殘留低:<0.02 Copies/U

通過對不同批次的UCF.ME® Thermostable RNase H進行宿主(E.coli)gDNA殘留檢測,結果顯示,3批次產品的宿主gDNA殘留量均遠低于0.02 copies/U,確保了產品的高純度和實驗的可靠性。

 

圖4.UCF.ME® Thermostable RNase H宿主gDNA殘留結果

 

03

無核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留

將25 U UCF.ME® Thermostable RNase H分別與核酸底物孵育,并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實驗結果表明,翌圣的3個批次UCF.ME® Thermostable RNase H均未檢測到核酸外切酶、切口酶或RNase殘留,為實驗結果的準確性和可靠性提供了有力保障。

 

圖5.UCF.ME® Thermostable RNase H核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結果

 

04

穩定性好

將UCF.ME® Thermostable RNase H分別置于4℃處理32天、25℃處理16天和37℃處理7天后,測定其酶活。結果顯示,酶活均無明顯下降,充分證明了翌圣UCF.ME® Thermostable RNase H在寬溫度范圍內具有優異的穩定性,能夠滿足不同實驗條件的長期存儲和使用需求。

 

圖6.UCF.ME® Thermostable RNase H加速穩定性結果

 

如需試用,請掃描文中二維碼聯系我們的技術人員,領取免費試用名額!

 

 

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來源

產品名稱

貨號

T. thermophilus

UCF.ME® Thermostable RNase H

14545ES

E. coli

RNase H

12906ES

 

參考文獻:

[1] Hollien J, Marqusee S. Structural distribution of stability in a thermophilic enzyme[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1999, 96(24): 13674-13678.

[2] Wolf E J , Dai N , Chan S H .Selective Characterization of mRNA 5′End-Capping by DNA Probe-Directed Enrichment with Site-Specific Endoribonucleases[J].[2025-03-03].

[3] Gu H , Sun Y H , Li X Z .Novel rRNA-depletion methods for total RNA sequencing and ribosome profiling developed for avian species[J].Poultry Science, 2021, 100(7):101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.



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