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在基因功能研究與藥物開發(fā)領域，精準解析基因表達調控機制是探索生命奧秘的關鍵一步。為滿足科研工作者對高效、可靠檢測工具的需求，我們正式推出雙熒光素酶報告基因檢測服務！通過的技術平臺和標準化操作流程，助您快速驗證啟動子活性、miRNA靶向作用、信號通路調控等關鍵問題，讓基因調控研究更精準、更高效！
反應原理
雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)是指以熒光素（luciferin）和腔腸素（coelenterazine）為底物，檢測螢火蟲熒光素酶（firefly luciferase）和海腎熒光素酶活性的一種雙報告系統(tǒng)。螢火蟲熒光素酶作為報告基因，催化luciferin 氧化成oxyluciferin，在luciferin 氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光；海腎熒光素酶作為內參基因，催化coelenterazine 氧化成coelenteramide，在coelenterazine 氧化的過程中，同樣也會發(fā)出生物熒光。通過熒光測定儀測定反應過程中釋放的生物熒光或使用酶標儀來檢測熒光素酶活性的變化。
圖1.熒光素酶生物發(fā)光化學反應示意圖
為什么選擇雙熒光素酶報告基因檢測？
雙熒光素酶系統(tǒng)（Firefly & Renilla Luciferase）是基因調控研究的“黃金搭檔"，通過雙信號校正技術，可有效消除實驗誤差（如細胞數(shù)量、轉染效率等干擾），顯著提升數(shù)據(jù)穩(wěn)定性和靈敏度。
適用場景
啟動子/增強子活性分析：定位關鍵轉錄調控區(qū)域，篩選功能性SNP位點； miRNA與靶基因互作驗證：確認miRNA對目標mRNA的直接調控關系； 信號通路調控機制研究：探究轉錄因子（如NF-κB、STAT3）對下游基因的調控作用； 藥物篩選與機制解析：評估化合物或生物藥對特定基因表達的調控效果。
服務優(yōu)勢
個性化方案設計：支持載體構建、突變體設計、實驗條件優(yōu)化等全流程服務； 結果有保障：團隊精通各類應用場景驗證，經驗豐富，全程提供技術解讀，售后無憂； 快速交付周期：標準實驗4-5周內提供原始數(shù)據(jù)及分析報告。
服務流程
三步輕松完成實驗
客戶提供
翌圣服務
方案設計、序列合成、質粒構建、轉染、報告基因檢測。
項目所得質粒及菌液、項目報告。
應用案例分享
雙熒光素酶驗證轉錄因子與啟動子區(qū)調控作用
基本原理
轉錄因子是一類參與基因轉錄調控的重要調節(jié)因子。不同轉錄因子的DNA 結合結構域識別不同基因啟動子區(qū)特定的堿基序列，行使抑制或激活該基因轉錄的功能。如圖3，將目的基因啟動子區(qū)域（通常取轉錄起始位點TSS 上游-2000bp）、或針對結合位點進行突變、或分段截斷序列，構建到報告基因載體luciferase 的上游，共轉染轉錄因子過表達質粒，通過熒光素酶活反映轉錄因子對啟動子活性的調控作用。
常見載體及分組
常用載體：pGL3-Basic 、pGL3-Promoter
常見檢測分組
1）轉錄因子NC + 啟動子對照質粒 + 海腎內參質粒；
2）轉錄因子NC + 啟動子野生型質粒 + 海腎內參質粒；
3）轉錄因子NC + 啟動子突變型質粒 + 海腎內參質粒；
4）轉錄因子質粒 + 啟動子對照質粒 + 海腎內參質粒；
5）轉錄因子質粒 + 啟動子野生型質粒 + 海腎內參質粒；
6）轉錄因子質粒 + 啟動子突變型質粒 + 海腎內參質粒。
操作流程
1、啟動子報告基因載體構建：將目的基因構建至雙熒光素酶報告基因載體的上，目的片段位于熒光素酶報告基因的上游，如構建至pGL3-basic。
2、轉染細胞：將熒光素酶報告質粒與內參報告質粒和共轉染目的細胞，由于內參的啟動子活性較強，通常報告質粒與內參質粒的轉染比例為10:1。
3、收集細胞：將裂解液加入細胞孔中，搖床常溫條件下?lián)u晃適當時間后進行離心，將上清轉移到新的管子中。
4、雙熒光素酶報告基因活性檢測：96 孔酶標版中加入20 ul細胞裂解液上清，加入100 μL螢火蟲螢光素酶反應液，震板混勻，檢測螢火蟲螢光素酶的活力，檢測盡量在30 min內完成。加入100 μL海腎螢光素酶反應液，震板混勻，檢測海腎螢光素酶的活力，檢測盡量在30 min內完成。。
5、數(shù)據(jù)處理：首先將Firefly luciferase/Renila luciferase得出比值，即可得到不同處理組的相對luciferase活性。
預期結果分析
（1）轉錄因子促進靶基因啟動子區(qū)轉錄活性
（2）轉錄因子抑制靶基因啟動子區(qū)轉錄活性
服務內容
立即預約，享上新優(yōu)惠！
即日起至2025年3月31日，首單客戶可享9折優(yōu)惠，同時免費贈送實驗方案設計服務！
無論是基礎研究還是藥物開發(fā)項目，我們的雙熒光素酶報告基因檢測服務都將成為您探索基因調控機制的強力工具。
相關產品清單
產品類別 | 產品名稱 | 產品貨號 | 產品規(guī)格 |
雙熒光素酶報告基因檢測試劑 | Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11402ES60/80 | 100T/1000T |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11405ES60/80 | 100T/1000T | |
轉染試劑 | Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 轉染試劑 | 40802ES01/03 | 100μL/1mL |
Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent轉染試劑 | 40806ES01/02/03 | 0.1mL/0.5mL /1mL | |
Hieff Trans® mRNA Transfection Reagent 轉染試劑 | 40809ES01/03 | 0.1mL/1mL |
