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干貨分享 | 細胞檢測與分析

2025-1-14  閱讀(147)

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細胞檢測與分析是指利用各種技術和方法來研究細胞的結構、功能、狀態以及其在不同條件下的變化。這些技術和方法廣泛應用于生物學、醫學、藥學等領域,對于疾病的診斷、藥物的開發和基礎科學研究都具有重要意義。

 

Yeasen提供細胞分析與檢測一站式解決方案,包括:細胞增殖與毒性、細胞凋亡與吞噬、細胞成像與示蹤、細胞衰老和各種亞細胞結構研究。

 

01
 

細胞增殖與毒性

細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖,是生物體生長、發育、繁殖以及遺傳的基礎。單細胞生物以細胞分裂的方式產生新的個體。多細胞生物,以細胞分裂的方式產生新的細胞,用來補充體內衰老或死亡的細胞。

 

//
 

方法介紹

 

    1)對活細胞的代謝活性的檢測:基于MTT、CCK-8等;

    2)DNA合成的檢測:基于BrdU的免疫法或EdU的點擊化學法,可通過流式細胞術等多種技術進行檢測;

    3)ATP含量測定;

    4)熒光探針檢測:CFDA-SE和Calcein AM。

     

     
     

    細胞代謝活性檢測

    1、MTT(噻唑藍)
    MTT是一種可接受氫離子的化合物染料,帶正電荷,具有細胞膜滲透性?;罴毎€粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源進入的MTT還原成為水不溶性的深藍色MTT-甲臜結晶,而死細胞不具有此功能。甲臜結晶是不能穿透細胞膜,因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內。甲臜結晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來,酶標儀下測定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細胞數目成正比,用以評估細胞存活狀況。

     

    2、CCK-8(Cell Counting Kit–8)
    CCK-8中的WST-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養基中,生成的甲臜量與活細胞數量成正比?;贑CK-8(WST-8)的試劑盒能高度準確地檢測細胞增殖,比MTT法及XTT法的靈敏度高5倍,能檢測更低的細胞數目。CCK-8可直接加入細胞樣品中,因此適合懸浮細胞和貼壁細胞的檢測。對細胞幾乎沒有毒性, 檢測完成后的細胞還可以繼續培養使用。

     
     

    DNA活性檢測

    1、BrdU
    Brdu,也稱為溴化去氧尿苷,一種合成的胸苷類似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷選擇性結合到細胞DNA中。從而檢測細胞DNA合成和標記細胞分裂,凋亡等行為。

     

    2、EdU
    EdU法檢測是Brdu方法的升級和突破。EdU(5-溴-2-脫氧尿嘧啶)是一種嘧啶類似物,可在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點擊"反應,一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價反應。

     
     

    ATP含量檢測

    ATP是細胞內最重要的能量分子,可以用來衡量細胞新陳代謝水平,并與活細胞數目具有良好的線性關系,因此,可通過ATP含量反應活細胞的數目。借ATP依賴的熒光素酶催化的熒光素發光反應,通過化學發光信號測定細胞內 ATP含量,從而檢測細胞活力或定量檢測活細胞數目,靈敏度高、線性范圍寬。

     
     

    熒光探針檢測

    Calcein-AM是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,發綠色熒光(Ex=490 nm,Em=515 nm)。 因其在傳統的Calcein(鈣黃綠素)基礎上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團,增加了疏水性,使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后,Calcein-AM(本身不發熒光)被細胞內的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein,從而被滯留在細胞內并發出強綠色熒光。

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    代謝活性檢測

    40201ES

    MTT 噻唑蘭

    40202ES

    阿爾瑪藍

    40203ES

    CCK-8試劑盒

    40205ES

    磺酰羅丹明B(SRB)細胞增殖和毒性檢測試劑盒

    40206ES

    MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

    40208ES

    臺盼藍染色法細胞活力檢測試劑盒

    ATP含量測定

    40210ES

    ATP Luminescent細胞活力檢測試劑盒

    DNA合成檢測

    40204ES

    5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)

    40275ES

    Yefluor488EdU細胞成像試劑盒(綠色熒光)

    40276ES

    YF®594 Click-iT EdU Imaging Kits(紅色熒光)

    40277ES

    YF®647A Click-iT EdU Imaging Kits(遠紅外色熒光)

    40287ES

    YF®488 Click-iT EdU Kits(植物細胞)

    熒光探針檢測

    40714ES

    CFDA SE 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

    40715ES

    CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

    40719ES

    鈣黃綠素,超純級

     

    02
     

    細胞凋亡與吞噬

    細胞凋亡(Apoptosis)是一種程序性細胞死亡過程,是多細胞生物體中的一種自然且受控的細胞自我毀滅方式。細胞凋亡在維持組織穩態、發育過程中器官和結構的塑造、免疫系統調節以及清除受損或不再需要的細胞等方面發揮著重要作用。

     

    //
     

    方法介紹

     

    1)Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術檢測;

    2)細胞核染色-熒光染色法(Hoechst/DAPI);

    3)DNA片段原位檢測(TUNEL);

    4)膜變化檢測(膜電位、線粒體功能完整性分析檢測)。

     

     
     

    Annexin V法

    在正常的活細胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細胞膜的內側,但在早期凋亡的細胞中,PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ(膜聯蛋白-V)是一種分子量為35-36 kDa的Ca2+ 依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力結合,可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。

     
     

    細胞核染色

    Hoechst 33342 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強烈的藍色熒光,對細胞的毒性較低。Hoechst 33342 常用于細胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。也可以用于普通的細胞核染色,或常規的DNA染色。

     
     

    TUNEL法

    組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA會發生斷裂,在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入FITC-12-dUTP,從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。

     
     

    膜變化檢測法

    JC-1/JC-10是一種陽離子脂質熒光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1/JC-10有單體和多聚體兩種存在狀態,低濃度時,以單體存在,可檢測到綠色熒光,用流式檢測時,通常為FL-1通道(和FITC同通道)高濃度時,以多聚體存在,可檢測到紅光,流式檢測通常為FL-2通道(和PE同通道)。因JC-1/JC-10濃度的變化,在單體和多聚體之間形成一個可逆的轉變過程。

     

    正常細胞,膜電位正常時,JC-1/JC-10通過線粒體膜極性進入線粒體內,并因濃度升高而形成發射紅色熒光的多聚體,而凋亡細胞,線粒體跨膜電位去極化,JC-1/JC-10從線粒體內釋放,濃度降低,逆轉為發射綠色熒光的單體形式。故而可以通過檢測綠色和紅色熒光檢測線粒體膜電位的變化。

     

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    Annexin V法

    40302ES

    Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

    40303ES

    Annexin V-EGFP/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

    40304ES

    Annexin V-YSFluor™ 647/PI Apoptosis Detection Kit

    40305ES

    Annexin V-YSFluor™ 488/PI Apoptosis Detection Kit

    40310ES

    Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒

    40311ES

    Annexin V-FITC/7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒

    40312ES

    Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD Apoptosis Detection Kit

    40313ES

    Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD Apoptosis Detection Kit

    TUNEL法

    40306ES

    TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(FITC)

    40307ES

    TUNEL Apoptosis Detection Kit (YSFluor™ 488)

    40308ES

    TUNEL Apoptosis Detection Kit (YSFluor™ 640)

    膜變化檢測法

    40705ES

    JC-1 線粒體膜電位熒光探針

    40706ES

    JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

    40707ES

    JC-10 線粒體膜電位熒光探針

    40752ES

    JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒

    細胞核染色

    40729ES

    Hoechst 33258

    40730ES

    Hoechst 33258 染液(1 mg/mL)

    40731ES

    Hoechst 33342

    40732ES

    Hoechst 33342 染液(1 mg/mL)

     

    03
     

    細胞衰老

    細胞衰老是指細胞在生長和分裂過程中逐漸失去分裂能力并進入一種不可逆的生長停滯狀態。這一過程是多細胞生物體中的一種自然現象,也是生物體衰老的一個重要標志。細胞衰老不僅影響個體的生理功能,還與多種疾病的發生發展密切相關。

     

    //
     

    方法介紹

     

    1)β-半乳糖苷酶試劑盒檢測;

    2)流式細胞術(PI染色)檢測細胞周期變化。

     

     
     

    β-半乳糖苷酶試劑盒檢測

    細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒,以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物,從而在光學顯微鏡下很容易觀察到藍色著色的表達β-半乳糖苷酶的細胞。

     
     

    細胞周期檢測

    細胞周期(cell cycle):指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程,通常由G0/G1期、S  期、G2期和M期組成。衰老的細胞阻滯于G1期,失去了對有絲分裂原的反應能力和合成DNA的能力,不能進入S 期。

     

    PI為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結合,其結合的量與 DNA的含量成正比例關系,用流式細胞儀進行分析,就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態,從而計算出各個時期的百分含量。

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    40754ES

    Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒

    40301ES

    Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒

     

    04
     

    亞細胞研究

    亞細胞研究是指對細胞內部各個組成部分(即亞細胞結構)的詳細研究,包括它們的結構、功能、相互作用以及在細胞生命活動中的作用。亞細胞結構包括細胞核、線粒體、內質網、高爾基體、溶酶體、細胞骨架等。通過亞細胞研究,科學家們能夠更深入地理解細胞的復雜機制,從而為疾病的診斷和治療提供新的思路。

     

     
     

    細胞骨架

    細胞骨架是一個動態且自適應的結構網絡,由微管、肌動蛋白絲和中間絲三種主要聚合物組成,在細胞內執行多種重要功能,包括空間組織、與外部環境連接以及產生力使細胞移動和變形,其功能通過眾多細胞質蛋白和細胞器的整合活動實現。

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    細胞骨架

    40735ES

    FITC Phalloidin FITC標記鬼筆環肽

    40734ES

    TRITC Phalloidin 羅丹明標記鬼筆環肽

    40782ES

    iFluor™ 350 phalloidin iFluor™ 350標記鬼筆環肽(藍色)

    40783ES

    iFluor™ 405 phalloidin iFluor™ 405標記鬼筆環肽(藍色)

    40736ES

    iFluor™ 488 phalloidin iFluor™ 488標記鬼筆環肽(綠色)

    40784ES

    iFluor™ 514 phalloidin iFluor™ 514標記鬼筆環肽(橘色)

    40785ES

    iFluor™ 532 phalloidin iFluor™ 532標記鬼筆環肽(橘色)

    40737ES

    iFluor™ 555 phalloidin iFluor™ 555標記鬼筆環肽(橘色)

    40786ES

    iFluor™ 594 phalloidin iFluor™ 594標記鬼筆環肽(紅色)

    40787ES

    iFluor™ 633 phalloidin iFluor™ 633標記鬼筆環肽(紅色)

    40762ES

    iFluor™ 647 phalloidin iFluor™ 647標記鬼筆環肽(遠紅)

    40788ES

    iFluor™ 680 phalloidin iFluor™ 680標記鬼筆環肽(紅色)

    40789ES

    iFluor™ 700 phalloidin iFluor™ 700標記鬼筆環肽(紅色)

    40790ES

    iFluor™ 750 phalloidin iFluor™ 750標記鬼筆環肽(紅色)

    40791ES

    iFluor™ 790 phalloidin iFluor™ 790標記鬼筆環肽(紅色)

     

     
     

    線粒體

    線粒體是細胞的能量工廠,是細胞內氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所,為細胞的活動提供了能量,細胞生命活動所需的能量95%來自線粒體。除了為細胞供能外,線粒體還參與諸如細胞分化、細胞信息傳遞和細胞凋亡等過程,并擁有調控細胞生長和細胞周期的能力。

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    線粒體

    40742ES

    MitoTracker® Green FM 線粒體綠色熒光探針

    40740ES

    MitoTracker® Red CM-H2XRos線粒體紅色熒光探針

    40741ES

    MitoTracker® Red CMXRos 線粒體紅色熒光探針

    40743ES

    MitoTracker® Deep Red FM 線粒體深紅色熒光探針

    40712ES

    Rhodamine 123 羅丹明123

    40705ES

    JC-1 線粒體膜電位熒光探針

    40706ES

    JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

    40707ES

    JC-10 線粒體膜電位熒光探針

    40752ES

    JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒

     

     
     

    細胞核

    細胞核的結構有核膜、核仁、染色質、核基質。主要功能是遺傳物質DNA儲存和復制的主要場所,是細胞遺傳和代謝的控制中心。


    1.核膜:雙層膜,其上有核孔,是細胞核與細胞質之間的物質交換通道,表現出明顯的選擇性,RNA、蛋白質等大分子進出必須通過核孔。
    2.核仁:在細胞有絲分裂過程中周期性消失(前期)和重現(末期)。
    3.染色質:能被堿性染料染成深色的物質,主要由DNA和蛋白質組成。
    4.核基質:是核中除染色質與核仁以外的成分,包括核液與核骨架兩部分。

     

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    細胞核

    40729ES

    Hoechst 33258

    40730ES

    Hoechst 33258 染液(1mg/mL)

    40732ES

    Hoechst 33342 染液(1 mg/mL)

    40731ES

    Hoechst 33342

    40710ES

    (1mg/ml)碘化丙啶染液(1mg/ml)

    40711ES

    PI (Propidium iodide) 碘化丙啶

    40727ES

    DAPI 4’,6-聯脒-2-苯基吲哚二yan酸鹽

    40728ES

    DAPI染液(5mg/ml)

    40722ES

    7-AAD 7-氨基放線菌素D

     

     
     

    溶酶體

    溶酶體是分解蛋白質、核酸、多糖等生物大分子的細胞器。溶酶體具單層膜,形狀多種多樣,是0.025~0.8微米的泡狀結構,內含許多水解酶。溶酶體在細胞中的功能是分解從外界進入到細胞內的物質,也可消化細胞自身的局部細胞質或細胞器。溶酶體的基本功能是對生物大分子的強烈消化作用,這對于維持細胞的正常代謝活動及防御微生物的侵染等都有重要的生物學意義。

     

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    溶酶體

    40738ES

    LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針

    40739ES

    LysoTracker Red DND-99 溶酶體紅色熒光探針

    40767ES

    LysoSensor™ Green DND-189   溶酶體綠色熒光探針

    40768ES

    LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 (PDMPO) 溶酶體黃/藍色熒光探針

     

     
     

    內質網

    內質網是細胞內的一個精細的膜系統。是交織分布于細胞質中的膜的管道系統。兩膜間是扁平的腔、囊或池。內質網有兩種類型,一類是在膜的外側附有許多核糖體,這種內質網叫粗糙型內質網或叫粗面內質網;另一類在膜的外側不附有核糖體,表面光滑,稱光滑型內質網或叫滑面內質網。內質網外與細胞膜相連,內與核膜的外膜相通,將細胞中的各種結構連成一個整體,具有承擔細胞內物質運輸的作用。內質網能有效地增加細胞內的膜面積,內質網能將細胞內的各種結構有機地聯結成一個整體。

     

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    內質網

    40761ES

    ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging

    內質網藍色熒光探針(活細胞)

    40763ES

    ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide), for live-cell imaging

    內質網綠色熒光探針(活細胞)

    40764ES

    ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide), for live-cell imaging

    內質網紅色熒光探針(活細胞)

     

     
     

    細胞膜

    細胞膜,又稱細胞質膜(plasma membrane),厚度約為7~8nm,細胞膜的化學組成基本相同,主要由脂類、蛋白質和糖類組成。其中,脂質的主要成分為磷脂和膽固醇。此外,細胞膜中還含有少量水分、無機鹽與金屬離子等。細胞膜作為細胞的邊界可將細胞內部與外環境分隔開,不僅在結構上為細胞提供了相對穩定的內環境,并參與了包括物質運輸、信號轉導、細胞凋亡和細胞自噬在內的許多重要生理活動。

     

    //
     

    產品詳情

     

    貨號

    產品名稱

    細胞膜

    40725ES

    DiO (DiOC18(3)) 細胞膜綠色熒光探針

    40726ES

    DiI (DiIC18(3)) 細胞膜橙紅色熒光探針

    40757ES

    DiR Iodide (DiIC18(7)) 細胞膜深紅色熒光探針

    40758ES

    DiD Perchlorate (DiIC18(5)) 細胞膜紅色熒光探針

     

    通過Yeasen先進的細胞分析與檢測產品,我們為科研人員提供了高效、準確的解決方案,助力他們在細胞生物學研究中取得突破。無論是高靈敏度的熒光檢測、精準的流式細胞術,還是高度自動化的細胞成像系統,我們的產品都能滿足您的多樣化需求。



     


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