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3’-5’方向的dsDNA外切酶，從dsDNA鏈的3’端逐個去除單核苷酸
2024-11-22 閱讀(370)
重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是一種新型核酸恒溫擴增技術，可以在37~42 ℃條件下，10~30 min內實現待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點，特別適用于基層和現場即時檢測，可廣泛應用于體外診斷、動物疫病、食品安全、生物安全、農業等領域。目前常用的與RPA擴增相結合的檢測方法有電泳法、熒光探針法、側流層析試紙條（LF-RPA）、絮凝分析檢測法，其中熒光探針法因操作簡便、靈敏度高、特異性強、無需開蓋處理產物（減少氣溶膠污染）等優勢，已發展為目前常用的一種結合RPA擴增的檢測手段。熒光探針法RPA主要在RPA擴增的基礎上，加入了Exonuclease III和exo熒光探針，在RPA擴增過程中Exonuclease III會特異地切割熒光探針（THF位點），導致熒光基團與淬滅基團分開，熒光信號被檢測到，通過熒光收集的儀器來實時監控熒光值的變化。翌圣特推出一款Exonuclease III（Cat#14525ES），為RPA擴增技術的廣泛應用助力。翌圣Exonuclease III是一種無堿基序列依賴性的核酸外切酶，該酶作用于雙鏈DNA，從3’OH末端方向逐步切去單核苷酸。該酶能降解平滑末端、3’凹陷末端及有切口的DNA，但是不能降解3’-突出末端大于或等于四堿基的序列。此外，該酶也有RNase H、3’-磷酸酶、脫嘌呤/嘧啶（AP）位點特異性核酸內切酶活性。RPA擴增中熒光探針的降解，釋放熒光信號；
分子信號放大技術中雙鏈DNA 3’平末端切割；
單鏈特異性探針的制備；
制備用于雙脫氧測序的單鏈底物；
雙鏈DNA的非定向巢式缺失。
圖3.對翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）進行核酸內切酶殘留檢測，結果顯示測試組與對照組條帶無明顯差異，說明翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）無核酸內切酶殘留。圖4.用翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）進行RT-RPA反應，擴增RNA病毒，檢測限低至10 copies/T。圖5.使用翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）在單克隆實驗前處理PCR回收產物，用于酶切去除產物中的短片段，提高單克隆陽性率。結果顯示翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）可顯著提高單克隆陽性率，且效果優于進口品牌A*的Exonuclease III產品。產品名稱 | 產品貨號 | 產品作用 |
Exonuclease III(100 U/μL) | 14525ES | 具有3’→5’外切酶活性，切斷熒光探針中淬滅基團，釋放熒光 |
Bsu DNA polymerase(Large fragment,5U/μL) | 11078ES | 結合引物與原始靶核酸序列互補合成新的DNA模板 |
T4UvsXRecombinase(2μg/μL) | 11079ES | 具有配對和鏈轉移活性的重組酶 |
T4UvsY protein(2μg/μL) | 11080ES | 重組酶輔助因子，刺激T4UvsX的單鏈DNA依賴性ATP酶活性并降低活性所需的T4UvsX臨界濃度 |
T4 gene 32 protein(gp 32)T4噬菌體基因32編碼蛋白 | 11081ES | 參與DNA復制、修復、重組與解鏈后的單鏈DNA結合，防止自雜交 |
Creatine Kinase(2μg/μL)肌酸激酶 | 14502ES | 刺激ATP和肌酸分解為磷酸肌酸 |
[1] 施奕,徐昌平,余蓓蓓,盧亦愚,梅玲玲.重組酶聚合酶擴增技術研究進展[J].病毒學報, 2020,36(03):522-532.[2] JiaLi, JoanneMacdonald, Stetten F. Review: a comprehensive summary of a decade development of the recombinase polymerase amplification[J]. The Analyst, 144.
