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關注！十月mRNA最新研究進展
冠疫情的持續凸顯了疫苗的重要性，mRNA以*的保護率成為所有冠種類中熱度最高的C位選擇。mRNA疫苗的應用場景不限于傳染病預防，在治療腫瘤、免疫疾病等領域都有令人期待的發展空間。mRNA的核心競爭力主要來源于序列設計和遞送系統，關于mRNA疫苗的最新研究技術，十月份又有不少新的進展。
研究進展
圖1. 論文截圖（源于網絡）
10月31日，哈佛大學威斯生物啟發工程研究所的研究員埃文·趙(Evan Zhao)和麻省理工學院(MIT)的博士后、威斯研究所的技術研究員安吉洛·毛(Angelo Mao)在Nature Biotechnology發表文獻[3]，研究人員找到了一種只在“讀取"細胞內特定RNA序列后才能生產轉基因基因的方法，從而開發出一種可以微調基因療法的技術，應用范圍從再生醫學到癌癥治療。
產業化進展
mRNA疫苗開發流程包括病原體識別、測序、mRNA體外合成、修飾、純化等操作。mRNA疫苗的研究制備需要多種原料來保證疫苗的成功開發，翌圣生物作為國內分子酶產業創新，通過*分子酶雙向技術平臺、大規模蛋白發酵純化技術平臺，目前已成功開發各類分子酶相關原料的產品。翌圣生物提供mRNA疫苗研究所需GMP級別原料并獲得廣大用戶的認可。
mRNA體外轉錄
mRNA疫苗的生產主要是通過體外轉錄（IVT）其過程主要是以DNA為模板，加上對應的底物和緩沖液通過體外轉錄得到。翌圣生物提供GMP級UCF.ME® T7 RNA Polymerase 和高性價比的Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit高產量體外合成試劑盒，包含一整套RNA合成所需試劑。
產品特點
• 高產量：2 h內產生200-250 µg，單次放大反應可產生毫克級RNA
• 高靈活性：可獲得無標記、標記以及加帽的RNA
• 通用性強：對于不同長度模板均表現出強大RNA合成能力
• 品質穩定：安捷倫2100測試純度高、批間差異小
測試數據
短片段：2-4h可有效轉錄
長片段：1-2h可有效轉錄
▲ 不同目的片段的轉錄產量
▲ 不同目的片段的轉錄品質測定
Pyrophosphatase,Inorganic
UCF.ME® Pyrophosphatase, Inorganic GMP-grade是大腸桿菌重組來源，嚴格按照GMP工藝要求生產，無病原體殘留和宿主殘留，避免雜質引起的不良反應、過敏反應，確保產品安全性。
未加入無機焦磷酸酶組
IPPA組
▲ 投入200ng模板量，RNA純化后稀釋20倍檢測產量，與空白相比，RNA產量可大幅度提高
mRNA加帽修飾
• GMP級:嚴格執行ISO13485質量管理規范，原料可追溯、可復制
• 無殘留:無核酸酶、切口酶殘留，內毒素含量低
• 純度高:純度 ≥95%（SDS-PAGE）
• 酶活力高:微量即可加帽
從上至下依次為：裸露RNA、Cap0 RNA、Cap1 RNA
調整酶量以及SAM的使用量，加帽可達100%
mRNA殘留去除
• GMP級:嚴格執行ISO13485質量管理規范，原料可追溯、可復制
• 高純度:純度≥95%（SDS-PAGE）
• 無殘留:無RNase，內毒素含量低
C為不加DNaseI 的對照組，進行轉錄模板去除實驗，Yeasen能很好的去除RNA中的DNA殘留
用于RNA建庫，與進口品牌T相比，性能相當
mRNA純化
•高效率:mRNA純化在45min內完成
•高純度:Oligo(dT) 磁珠特異性吸附mRNA
•靈活:兼容手動和自動化操作平臺
•可靠:獲得的mRNA適用NGS、體外翻譯、RT-PCR和cDNA合成
▲ mRNA Isolation Kit純化不同RNA樣本中的mRNA 管家基因產量表征mRNA回收效果。rRNA相關基因產量表征rRNA去除效果
相關產品
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
UCF.ME® mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade | 10614ES84/92 | 2000/10000U |
UCF.ME® mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade | 10612ES84/92 | 2000/10000U |
UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade（1 KU/μl） | 10613ES92/97 | 10/50KU |
UCF.ME® Murine RNase inhibitor GMP-grade | 10621ES10/20 | 10/20 KU |
UCF.ME® Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade | 10620ES10/60 | 10/100U |
UCF.ME® DNase I , RNase-free ，GMP-grade | 10611ES76/84 | 500/2000U |
Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit | 10623ES50/60 | 50/100T |
S-adenosylmethionine (SAM) | 10619ES02 | 0.5ml |
GTP Solution(100mM) | 10132ES03 | 1ml |
NTP Set Solution(ATP, CTP, UTP, GTP, 100 mM each） | 10133ES03 | 1 Set (4 vial) |
參考文獻>>
[1] Lokugamage MP, Vanover D, Beyersdorf J, et al. Optimization of lipid nanoparticles for the delivery of nebulized therapeutic mRNA to the lungs. Nature biomedical engineering 2021;5(9):1059-1068.
