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FFPE樣本是什么?
做病理的小伙伴對FFPE樣本肯定不陌生,FFPE(Formalin-Fixed and Parrffin Embedded)樣本是福爾馬林固定石蠟包埋的樣本,固定包埋的方法能夠使組織在常溫保存很長時間。早FFPE樣本主要是用于病理形態學觀察,近些年,隨著精////準醫療的滲透發展,FFPE樣本在臨床病理檢驗、腫瘤基因檢測中也得到廣泛使用。
圖1 FFPE樣本
人們將FFPE樣本中的核酸提取出來進行建庫,然后利用高通量測序技術對FFPE樣本的核酸進行測序和分析,就能得到病理和腫瘤相關的很多重要信息。加上FFPE樣本方便保存的特點,不論在檢驗檢測還是醫學研究中都是一個好幫手。
FFPE樣本建庫的不完美
福爾馬林固定石蠟包埋樣本雖然使組織得以長期保存,但其特殊的制作方法和保存過程會對核酸分子造成多方面的影響:
- 福爾馬林固定使核酸與蛋白發生交聯,影響核酸提取質量;
- 石蠟高溫滲入過程加速磷酸二脂鍵的水解,導致核酸降解;
- 福爾馬林固定以及不理想的保存條件使胞嘧啶脫氨基引入C→T,G→A等突變;
- 固定和包埋增加核酸分子脆性,造成核酸高度片段化等。
這使得FFPE樣本中的核酸質量往往很差,用FFPE樣本建庫測序就面臨諸多挑戰:
怎么辦,拿FFPE樣本沒法子了么?
FFPE DNA修復試劑
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent是針對FFPE樣本而設計的修復試劑,可修復低質量FFPE樣本不同程度的損傷,提高文庫產量及測序質量。具體來說,能修復胞嘧啶脫氨成尿嘧啶、切刻與缺口、堿基氧化、3’端封閉等損傷類型。
損傷類型 | 是否修復 |
胞嘧啶脫氨成尿嘧啶 | √ |
切刻與缺口 | √ |
堿基氧化 | √ |
3’端封閉 | √ |
DNA////片段化 | × |
核酸蛋白交聯 | × |
FFPE DNA修復試劑可搭配市面上通用的建庫產品,完成FFPE樣本的損傷修復;配合翊圣生物Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit(Cat#12199,13310)建庫試劑盒使用,只需要把修復試劑加到反應體系中就可以了,不需要額外的操作步驟,很方便呦。
DNA修復顯著提高文庫產量
圖2是用翊圣UltimaTM DNA建庫試劑盒(Cat#12199)建庫,測試翊圣FFPE DNA Repair Reagent(Cat#12606)對建庫產量的影響的數據。
圖2 FFPE修復試劑盒對建庫產量的影響(Input DNA: 10 ng; Cycles:10)
從測試結果看,Hieff NGS® FFPE DNA修復試劑顯著提高了文庫產量,尤其對于低質量的FFPE DNA樣本,產量提升了3倍!
如果你正為低質量的FFPE樣本DNA建庫而苦惱,不如試試FFPE DNA修復試劑吧。FFPE樣本建庫,你需要的修復試劑在這里:Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent (Cat#12606)