聯系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·13年
- 聯系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
- 網址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機商鋪
活死細菌、細胞檢測
-----探尋生命的奧秘
背景介紹
真核生物（哺乳動物細胞）和原核生物（細菌）細胞增殖和細胞死亡間平衡對維持細胞有機的發育與生命的維持至關重要，如果出現失衡將導致各種疾病的發生。活死狀態是研究生物增殖生長的常見研究目的，例如；對于真核活死細胞主要通過分析細胞質膜完整性與細胞內酯酶活性，經過特定儀器觀察判斷，為研究細胞狀態提供了一種方便的方法，同時分析活細胞與死細胞，用于評估細胞的活力。可以應用于大多數的真核哺乳動物細胞，但不適用于真菌和酵母。主要對于藥物研究、毒性判定、細胞生長狀態研究等。
翊圣生物經過匠心研發提供針對真核細胞和原核細胞的雙染檢測試劑盒，滿足您的研究所需。
檢測原理
一、 細胞染色
Calcein-AM是一種常用的對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，發綠色熒光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。 因其在傳統的Calcein（鈣黃綠素）基礎上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后Calcein-AM（本身不發熒光）被細胞內的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細胞內并發出強綠色熒光。與其它同類試劑（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein, AM細胞毒性極低，適合用于活細胞染色的熒光探針，而且不會抑制任何的細胞功能，如增殖和淋巴球的趨化性。
由于死細胞缺乏酯酶，Calcein-AM僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標記。因此，Calcein-AM常常與死細胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯合使用，同時進行活細胞和死細胞的熒光雙重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿過活細胞的細胞膜，僅能穿過死細胞膜的無序區域而到達細胞核，并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI僅對死細胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。而用545 nm激發，僅可觀察到死細胞。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、熒光酶標儀、流式細胞儀以及其他熒光檢測系統。
二、細菌染色
熒光染料DMAO是一種綠色核酸熒光染料，可將活細菌和死細菌染色。EthD-III是一種紅色核酸熒光染料，僅能對細胞膜受損的死細菌染色。將DMAO和EthD-III混合使用染色時具有完整細胞膜的細菌呈現綠色，而具有受損細胞膜的細菌呈現綠色和紅色。結果可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀來分析，適用于大多數細菌類型。
細菌活力的常見標準是細菌在合適的營養培養基中繁殖的能力，稱為生長測定。該試劑盒通常與在液體或固體培養基中的生長測定結果有著很好的一致性。在某些條件下，膜損傷的細菌可能會在營養培養基中恢復并繁殖，而這種細菌在該測定中可能會被認為死亡。相反，一些具有完整膜的細菌可能無法在營養培養基中繁殖，但這些細菌在該測定中可能被認為是活的。因此，如果發現該檢測和細菌生長測定之間有相當大的差異，應該考慮上述的可能性。
應用檢測
使用結果
1、細胞染色結果
注：細胞類型=A375膠質瘤細胞，Calcein-AM=2 μM，PI=4.5 μM，染色時間=15min
A為Calcein-AM染色圖，B為PI染色圖，C為MERGE圖
2、細菌染色結果
注：細胞類型=大腸桿菌，EthD-III=2 ul，DMAO=4 ul，染色時間=15min
A為EthD-III染色圖，B為DMAO染色圖，C為MERGE圖
相關產品
產品貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(¥) |
40747ES76/80 | Calcein-AM/PI Double Stain Kit Calcein-AM/PI活細胞/死細胞雙染試劑盒 | 500/1000T | 853/1453 |
40274ES60 | Live & Dead Bacterial Staining Kit活細菌/死細菌染色試劑盒 | 100T | 3683 |
HB190704
