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細(xì)胞骨架的染色神器-鬼筆環(huán)肽
細(xì)胞骨架是網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)，是高度動(dòng)態(tài)的，不同時(shí)期有不同的形態(tài)。它主要是由微絲，微管和中間絲所組成的。微絲主要是肌動(dòng)蛋白組成的，肌動(dòng)蛋白分成肌動(dòng)蛋白單體（G-actin）和纖維狀蛋白單體（F-actin）。游離的肌動(dòng)蛋白還會(huì)有ATP和Mg+ 。微絲的組裝就是G-actin 變成F-actin的過(guò)程。
鬼筆環(huán)肽是一種雙環(huán)七肽，最早發(fā)現(xiàn)的環(huán)狀肽之一，是從鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離出來(lái)的。通過(guò)結(jié)合和穩(wěn)定纖維狀肌動(dòng)蛋白（F-actin）發(fā)揮功能，并有效防止肌動(dòng)蛋白纖維解聚。由于其與F-肌動(dòng)蛋白的緊密和選擇性結(jié)合，從而顯示微絲骨架在細(xì)胞中的分布，因此含鬼筆環(huán)肽的熒光標(biāo)記已廣泛用于生物顯微技術(shù)中。
Yeasen生物鬼筆環(huán)肽產(chǎn)品種類(lèi)很多，主要是標(biāo)記的熒光基團(tuán)的不同，激發(fā)出的熒光顏色不同，對(duì)于選擇需要機(jī)器滿(mǎn)足激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)要求不同，用于區(qū)分共染時(shí)其他熒光染料的熒光顏色。
實(shí)驗(yàn)流程：
鬼筆環(huán)肽的配制：
0.1mg鬼筆環(huán)肽溶于1ml無(wú)水甲醇（也可用DMSO或無(wú)水乙醇溶解）配成貯存液，可在-20度避光的條件下長(zhǎng)期保存，工作液的濃度為5ug/ml，由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
染色程序：
生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次，每次10分鐘；3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；加入5ug/ml的FITC-鬼筆環(huán)肽室溫染色30-60分鐘，夏季時(shí)間可以短一些，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；DAPI或hoechst33258染細(xì)胞核10分鐘，生理鹽水PBS清洗細(xì)胞2次；吸去多余水分，加熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油），蓋上蓋玻片，熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
客戶(hù)實(shí)例：
客戶(hù)來(lái)源：四川大學(xué)口腔醫(yī)院
細(xì)胞類(lèi)型:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
標(biāo)尺:100μm
引文出處：Zhu Z , Jiang S , Liu Y , et al. Micro or nano: Evaluation of biosafety and biopotency of magnesium metal organic framework-74 with different particle sizes[J]. Nano Research, 2020, 13(2):511-526.
產(chǎn)品介紹：染色使用的產(chǎn)品為FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽，染色為綠色熒光。圖片為通過(guò)MTT法和FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽以及DAPI染色確定Mg-MOF74對(duì)BMSCs的安全劑量，確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)在安全劑量的范圍內(nèi)進(jìn)行。
細(xì)胞類(lèi)型：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
標(biāo)尺:50μm
引文出處：Fan Z, Xiao L, Lu G, Ding Z, Lu Q. Water-insoluble amorphous silk fibroin scaffolds from aqueous solutions. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2020;108(3):798-808. doi:10.1002/jbm.b.34434
產(chǎn)品介紹：染色使用的產(chǎn)品為羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽，染色為紅色熒光。圖片為羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽染色以及DAPI染核，在共聚焦顯微鏡下觀察不同再生絲素蛋白支架上骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的情況。
總結(jié)：
熒光和生物素化的鬼筆環(huán)肽衍生物，與肌動(dòng)蛋白抗體相比具有明顯優(yōu)勢(shì)。鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物的結(jié)合不會(huì)隨物種（包括動(dòng)植物）的肌動(dòng)蛋白變化而發(fā)生明顯改變。此外，他們的非特異性染色可忽略不計(jì)。因此染色區(qū)和未染色區(qū)之間的對(duì)比度很高。
注意事項(xiàng)：
1.鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過(guò)細(xì)胞，不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。
2.毒性較大，戴上手套操作。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
（1）親和力高：Kd= 20 nM；
（2）特異性強(qiáng)：選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin，而不會(huì)與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合；
（3）優(yōu)于抗體染色：鬼筆環(huán)肽無(wú)物種限制，且?guī)缀醪淮嬖诜翘禺愋匀旧?，染色區(qū)和非染色區(qū)域?qū)Ρ刃詷O其明顯；
（4）靈敏度高：納摩爾濃度（nM）染色即可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求；
（5）兼容性好，肌動(dòng)蛋白活力不受影響：鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Da，標(biāo)記后的肌動(dòng)蛋白許多生理特性都得以維持；
（6）適用范圍廣：無(wú)物種差異性；同樣適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。
FAQ：
Q1：鬼筆環(huán)肽染色可以在活細(xì)胞中進(jìn)行嗎？
A：鬼筆環(huán)肽的染色需要對(duì)樣品進(jìn)行固定和透化，幫助鬼筆環(huán)肽和F-actin的結(jié)合，得到更好的染色效果。
Q2：我的細(xì)胞樣品轉(zhuǎn)染了帶有GFP的質(zhì)粒，我應(yīng)該選擇哪一款鬼筆環(huán)肽？
A：可以選擇TRITC（橙色），iFluorTM 555（橘色）或是iFluorTM 647（遠(yuǎn)紅）標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽。
Q3：染色貼壁細(xì)胞，每個(gè)樣品大概需要多少工作液？
A：染色貼壁細(xì)胞只需要染色工作液能夠*覆蓋細(xì)胞即可。
Q4:幾種不同的鬼筆環(huán)肽的區(qū)別是什么，如何選擇？
A:是熒光基團(tuán)的不同，激發(fā)出的熒光顏色不同，用于區(qū)分共染時(shí)其他熒光染料的熒光顏色，對(duì)于選擇需要機(jī)器滿(mǎn)足激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)要求。
Q5:鬼筆環(huán)肽染色存在種屬區(qū)分嗎？
A:對(duì)于動(dòng)物活細(xì)胞染色，不區(qū)分種屬。
訂購(gòu)信息：
產(chǎn)品 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
Phalloidin 鬼筆環(huán)肽 | 40774ES03 | 1 mg | 5788.00 | 5788.00 |
Phalloidin 鬼筆環(huán)肽 | 40774ES08 | 5 mg | 18728.00 | 18728.00 |
Amino-Phalloidin 氨基鬼筆環(huán)肽 | 40733ES03 | 1 mg | 6399.00 | 6399.00 |
TRITC Phalloidin 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 | 40734ES75 | 300 T | 1533.00 | 785.00 |
TRITC Phalloidin 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 | 40734ES80 | 1 mg | 6456.00 | 6456.00 |
FITC Phalloidin FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 | 40735ES75 | 300 T | 1533.00 | 785.00 |
FITC Phalloidin FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 | 40735ES80 | 1 mg | 6456.00 | 6456.00 |
iFluor 488 phalloidin iFluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（綠色） | 40736ES75 | 300 T | 2126.00 | 1853.00 |
iFluor 555 phalloidin iFluor 555標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（橘色） | 40737ES75 | 300 T | 2126.00 | 1853.00 |
iFluor 647 phalloidin iFluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（遠(yuǎn)紅） | 40762ES75 | 300 T | 2126.00 | 1853.00 |
