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產品簡介
活體細胞溶酶體膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒是一種旨在通過吖啶橙吸收和細胞內再分布檢測技術，選擇性地聚集在線粒體內呈現熒光染色，即存在于或由溶酶體釋放到細胞漿的熒光染料的不同熒光強度變化，來分析和觀察溶酶體膜通透性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種活體細胞溶酶體（動物、人體、昆蟲等）膜通透性的檢測。
詳細介紹
本頁描述的產品僅供科學實驗研究使用，不用于臨床，非醫療器械，不做其他用途。
產品編號：10387.1
名稱：活體細胞溶酶體膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒
規格：20次
價格：客服
活體細胞溶酶體膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙熒光檢測試劑盒保存方式：
保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月
用戶自備
24孔細胞培養板：用于貼壁細胞染色的容器
1.5毫升離心管：用于細胞染色的容器
微型臺式離心機：用于沉淀細胞
培養箱：用于染色孵育
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于細胞熒光分析
熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于細胞熒光定量分析
細胞流式儀：用于細胞熒光分析
實驗步驟
- 貼壁細胞染色
- 準備1個細胞培養24孔板的待測細胞（注意：可以使用載玻片，載玻片培養皿，35mm培養皿，和其它培養孔板，見注意事項8）
- 小心抽去細胞培養液
- 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A）到1個細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
- 小心抽去清理液
- 小心沿著孔壁加入xx微升染色液（Reagent B）到1個細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
- 放進37℃細胞培養箱里孵育15分鐘，避免光照
- 小心抽去染色液（Reagent B）
- 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A）到細胞培養孔
- 小心抽去清理液
- 重復實驗步驟8和9一次
- 小心沿著孔壁加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A）到細胞培養孔
- 選擇下列方式之一進行操作：
（A）使用倒置熒光顯微鏡觀察（定性檢測）：
激發波長490nm，散發波長528nm――綠色熒光增強，表明膜通透性（LMP）增強
激發波長555nm，散發波長617nm――紅色熒光減弱，表明膜通透性（LMP）增強
- 使用熒光分光光度儀或熒光酶標儀檢測（定量檢測）：
激發波長490nm，散發波長528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增強
激發波長555nm，散發波長617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增強
二、懸浮細胞或脫離細胞染色
1．將懸浮細胞或脫離細胞（1 X 106細胞）移入到1.5毫升離心管
2．放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3．小心抽去上清液
4．加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
5．放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6．小心抽去上清液
7．加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
8．加入xx微升含有染色液（Reagent B），充分混勻
9．放進37℃細胞培養箱里孵育15分鐘，避免光照
10．放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
11．小心抽去上清液
12．加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
13．放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
14．小心抽去上清液
15．重復實驗步驟12至14一次
16．加入xx微升37℃預熱的清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
17．選擇下列方式之一進行操作：
a)進行細胞流式儀分析：FL1（激發波長488nm，散發波長528nm），或FL3（激發波長555nm，散發波長617nm）觀察10000個細胞以上――
FL1：波峰右移，表明膜通透性（LMP）增強
FL3：波峰左移，表明膜通透性（LMP）增強
b)或使用（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（定性檢測）：
1）移取10微升上述細胞懸液到載波片上，蓋上蓋玻片
激發波長490nm，散發波長528nm――綠色熒光增強，表明膜通透性（LMP）增強
激發波長555nm，散發波長617nm――紅色熒光減弱，表明膜通透性（LMP）增強
c)或使用熒光分光光度儀檢測（定量檢測）：
1）移取500微升上述細胞懸液到1毫升比色杯
2）加入xx微升清理液（Reagent A）
3）上下傾倒混勻數次
4）放進熒光分光光度儀：
激發波長490nm，散發波長528nm――RFU升高，表明膜通透性（LMP）增強
激發波長555nm，散發波長617nm――RFU降低，表明膜通透性（LMP）增強
注意事項
1．本產品為20次（0.5毫升體系/次）操作
2．操作時，須戴手套
3．操作時，避免污染母液
4．建議細胞染色完成后，即刻進行熒光檢測分析
5．孵育時，必須避免光照
6．本產品適合各種規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35mm培養皿，和各種培養孔板，須相應
調整處理液：
操作容器 建議操作體系
載玻片 100微升
載玻片培養皿 1毫升
35mm培養皿 1毫升
96孔培養板 100微升
48孔培養板 200微升
24孔培養板 500微升
12孔培養板 1毫升
6孔培養板 2毫升
25cm2細胞培養瓶 3毫升
7．可以使用綠色熒光中激發波長490nm±20，散發波長528±38；紅色熒光中激發波長555±28，散發波長617±50
8．用戶可以持續讀數5分鐘，觀察熒光讀數的增強或減低，以表明熒光染料的移位變化
9．本公司提供系列溶酶體分析試劑產品