化工儀器網技術文章
哈靈實驗室教大家如何正確復蘇細胞
閱讀：1381 發布時間：2015-5-21哈靈實驗室教大家如何正確復蘇細胞
細胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢?沒錯，就是記得到時間了，拿出來復蘇。那么，細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態檢查的作用何在?今天就為大家一一解答。 一、活力檢查：千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發現有污染毫不猶豫的丟棄! 二、形態檢查：檢查細胞的固有形態和生長行為。 三、凍存細胞： 1. 補充新的培養液：在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養液。在細胞長至70%單層時收獲細胞，計數活細胞數，用凍存液調整細胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據不同的細胞類型調整) 2. 凍存液：用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞，有不同類型的凍存液，根據細胞類型選擇合適的凍存液。 在凍存管上標記好細胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過1.5ml.。程序降溫是保證凍存細胞活性的關鍵，使用 Mr. Frosty(找生物注一種裝置)保證降溫速度為1°-3°C，置于-80°C冰箱內*夜，如果沒有Mr. Frosty裝置，可以使用實驗室常見的泡沫盒、棉花等。放入液氮罐之前記錄凍存管的數量和位置。以快的速度轉移凍存管知液氮罐內，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息，做好記錄是非常非常重要的! 四、細胞復蘇：正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，當從液氮罐內取出細胞時，有可能會出現凍存管破裂的情況，使用保護面罩和防護服十分必要。從液氮內轉移凍存管至熱的(溫度高的)容器內，應在液氮內完成。應該與37℃水浴中快速溶解凍存的細胞，并保證凍存管蓋子在水面之上以避免污染。當小的冰塊溶解后，用70%酒精擦拭凍存管，并迅速轉移至新的已經預熱的培養基內。觀察細胞生長形態和生長比率。 其實，細胞復蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 如有其他不了解的相關方面，還可以直接我公司，我們有專業技術人員為您解答，期待您的來電！ |