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哈靈生物實驗室——血清常見問題及解決
閱讀：1060 發(fā)布時間：2015-5-21哈靈生物實驗室——血清常見問題及解決
血清是細胞培養(yǎng)中重要的元素之一。因此，我整理了一些相關(guān)資料，也是實驗室里常會遇到的問題，僅供大家參考：
1、保存血清的方法？
我們建議血清應(yīng)保存在-5C至-2OC。然而，若存放于4C時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2、如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4.何謂熱滅活?
一般是以56C，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
5、有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37C環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保您血清的質(zhì)量!另外，購買已滅活成品也不失一個捷徑，請在購買的時候注意詢問廠家是否是已滅活血清。
6、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作:
*解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
*解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
*請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
*血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
*若必須做血清的熱滅活，請遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。