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凝膠過濾填料的作用和層析原理

閱讀:2623      發布時間:2022-6-6
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  凝膠過濾填料的分離原理主要有兩方面:以凝膠過濾作用為主,兼具反相分配的作用(在反相溶劑中)。因為凝膠過濾作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脫下來,小分子的化合物保留強,后出柱。自GE的葡聚糖凝膠G25問世以來,到現在已經有65年的歷史,G系列的填料也是古老和經典的凝膠排阻系列填料,這種填料大的缺點就是不耐壓(尤其是G-100和G-200,流體靜力壓要求非常低)和分辨率差,G25填料一般用于透析和較低分子量多糖或蛋白分離,一般情況G25填料溶脹需要16-24h,溶脹好后的填料從色譜柱側面看有一種多糖*的乳光。
  凝膠過濾填料層析原理:
  凝膠過濾:依賴于分子的大小和形狀。
  吸附層析:依賴于被分離化合物與凝膠之間的氫鍵數量和質量。
  分配層析:依賴于分離化合物在流動相(溶劑)和固定相(凝膠)之間的分配,這主要由樣品的極性和溶劑的極性決定的。
  凝膠過濾填料可應用于膽固醇、脂肪酸、激素、維他命、天然產物的分析。Sephadex LH-20的分離原理主要有兩方面:以凝膠過濾作用為主,兼具反相分配的作用(在反相溶劑中)。因為凝膠過濾作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脫下來,小分子的化合物保留強,后出柱。如果使用反相溶劑洗脫, Sephadex LH20對化合物還起反相分配的作用,所以極性大的化合物保留弱,先被洗脫下來,極性小的化合物保留強,后出柱。如果使用正相溶劑洗脫,這主要靠凝膠過濾作用來分離。

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