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上海北諾生物科技有限公司
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1. 在6孔板中接種1~3×105細胞/孔,加入2ml*培養基,置CO2孵箱中37℃培養過。
2. 待細胞長到50-80%單層時,在無菌離心管中配制如下溶液:
i. 溶液A:將4?g待轉染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養基中,靜置5min
ii. 溶液B:將2-25?l LipofectAMINE 稀釋到250?l無血清培養基中,靜置5min
3. 混合溶液A和B,輕輕混勻,室溫放置15-45min。
4. 用2ml無血清培養基輕輕洗滌細胞,加入0.8ml無血清培養基/孔,將脂質體復合物滴加到孔中,輕輕搖晃混勻,置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。
5. 用*培養基替換轉染液,繼續培養。
6. 24-72hr后檢測蛋白質的表達或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩定表達株。