NobleRyder還原型抗壞血酸維生素C含量測試盒

測定意義：AsA又稱維生素C。AsA是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細胞中最重要的抗氧化劑，AsA在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也是衡量農作物產品品質的重要指標之一。 
測定原理：抗壞血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通過測定AsA的氧化速率，即可計算出AsA含量。 
自備儀器和用品：研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、1 mL石英比色皿、可調式移液器和蒸餾水。 
操作步驟：
一、樣品中AsA提取：
按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑

一）進行冰浴勻漿，10000rpm 4℃離心20min，取上清液待測。

二、AsA測定操作： 
1.分光光度計預熱30 min，調節波長到265 nm，蒸餾水調零。 
2.試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min以上。 
3.標準管：依次在比色皿中加入100μL標準液、800μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻，在265nm測定，記錄30s和150s的吸光值A1和A2，△A標準管= A1-A2。 
4.測定管：依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻，在265nm測定，記錄30s和150s的吸光值A3和A4，△A測定管= A3-A4。 
三、AsA含量計算: 
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下 
（1）按蛋白濃度計算 
AsA (μmol/mg prot) =[C標準液×（△A測定管÷△A標準管×V標準）÷（Cpr ×V樣）
=0.1 ×△A測定管÷△A標準管÷Cpr 
（2）按樣本鮮重計算 
AsA (μmol/g ) =[C標準液×（△A測定管÷△A標準管×V標準）÷（W ×V樣÷V樣總）
=0.1 ×△A測定管÷△A標準管÷W 

C標準液：100μmol/L；V 標準：標準液體，0.1mL；V樣總：上清液總體積，1.0 mL=1 ×10-3 L；

V 樣：加入反應體系中上清液體積，0.1mL ；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量（g）。

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