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公司動態(tài)
士鋒生物單相瓊脂擴散試驗
點擊次數：695 發(fā)布時間：2013-11-18
原理
一種定量試驗，將一定量的抗體混合于瓊脂內，傾注于玻片上，凝固后，在瓊脂層上打孔，再將抗原加入孔中，使其向四周擴散。抗原抗體復合物形成的沉淀環(huán)直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標準抗原制成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從標準曲線中求出。本試驗主要用于檢查標本中各種免疫球蛋白和血清IgG含量。
材料
1．抗體：羊抗人IgG單價抗血清。
2．抗原：待檢血清。
3．3％生理鹽水瓊脂、生理鹽水、載玻片、直徑３mm打孔器、小三角燒瓶、毛細滴管、濕盒。
方法
1、制備含抗體的瓊脂板
取羊抗人IgG單價抗血清一瓶（效價1：80），量取0.3ml于一小三角燒瓶中，加生理鹽水11.7ml（40倍稀釋混勻，置56℃水浴中恒溫2~3分鐘）。
取3%生理鹽水瓊脂一管，隔水加熱使溶，然后置56℃水浴中，待瓊脂溫度降至56℃時，立即加入等量1：40稀釋抗血清，迅速輕輕混勻，勿使產生氣泡，迅速傾入載玻片上，每片3.5ml，待凝固后打孔。如下圖所示。
2、稀釋待檢血清
將待檢血清用生理鹽水作40倍稀釋，
3、打孔、加樣
每份檢樣加兩孔，加滿（但不要溢出），加樣時毛細滴管不要劃破瓊脂。
4、溫育
將瓊脂板置搪瓷盒，墊濕紗布或海綿以防干燥，37℃恒溫箱24h。
結果觀察與分析
測量并求出每份檢樣兩孔的沉淀環(huán)平均直徑，按照標準曲線求出IgG含量。