QQ交談
您所在位置：產品搜索
請輸入產品關鍵字：
聯系方式
地址：上海市寶山區錦樂路
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://www.zjmenchuan.com/st236594/
郵編：200431
聯系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發送留言
個性化：www.shifengsj.com
網址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://www.zjmenchuan.com/st236594/
公司動態
如何用磷酸鈣法來轉染HEK293T細胞
點擊次數：776 發布時間：2013-10-15
一.試劑配制
無菌水ddw： 高溫滅菌; 分裝;
2XHBS： 280mM NaCl
10mM KCl
1.5 mM Na2HPO4
12 mM glucose
50 mM HEPES
Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 過濾滅菌，分裝;
2M CaCl2： 過濾滅菌，分裝。
二. 實驗過程：
1. 鋪細胞： 選擇狀態良好的293t細胞傳代， 2-3x105個細胞/35mm dish。
2. 20-24h后，待細胞長至鋪滿瓶底約50-70%的時候，進行轉染。下面就35mm dish為例，采用以下轉染體系：
ddw： 105ul
plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul）
2M CaCl2： 16.5ul
2XHBS： 125ul
按上述順序，往eppendorf管中依次加入上述四種試劑。
先將前三者混勻， zui后加2XHBS。
一種方法是，加2XHBS時要逐滴加入， 吹打至微現乳白色， 立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。
另一種方法是， 加入2XHBS后立即吹打約40下（不過這個要根據每個人的力道和吹打的頻率而定， 建議做一個梯度實驗，吹打不同的次數看哪次的轉染效率高以后就按這個次數來吹打）， 之后步驟同上， 立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。