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士鋒生物雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)的特點(diǎn)
點(diǎn)擊次數(shù)：4930 發(fā)布時(shí)間：2013-8-26
雙縮脲試劑主要用于蛋白鑒定的試劑。其組成成分雖與菲林試劑相同，但兩者的方法和原理卻是大有不同。本文主要是介紹蛋白鑒定的常用試劑雙縮脲的基本情況，以及其與菲林試劑的區(qū)別。
雙縮脲試劑（biuret reagent）是由雙縮脲試劑A（NaOH）和雙縮脲試劑B（CuSO4）兩種試劑組成.
雙縮脲試劑A的成分是氫氧化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 g/mL的水溶液;
雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01 g/mL的水溶液。
雙縮脲試劑可以驗(yàn)證蛋白質(zhì)的存在。
具體方法是：
先將雙縮脲試劑A加入組織樣液，振蕩均勻（必須營(yíng)造堿性環(huán)境），再加入雙縮脲試劑B，振蕩均勻。如果組織里含有蛋白質(zhì)，那么會(huì)看到溶液變成紫色。具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產(chǎn)生紫色反應(yīng)。蛋白質(zhì)的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡(luò)合成紫紅色的絡(luò)合物。顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。
雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。
雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，因蛋白質(zhì)中也有-CONH-基也可用于檢驗(yàn)蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)接觸后的顏色呈紫色。
在使用雙縮脲試劑時(shí)候，必須注意，必須是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液，再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液。（若先加入硫酸銅[CuSO4]溶液，再加入氫氧化鈉[NaOH]溶液，則無(wú)法充分制造堿性環(huán)境，此時(shí)CuSO4會(huì)與NaOH發(fā)生復(fù)分解反應(yīng)，生成藍(lán)色氫氧化銅[Cu（OH）2]沉淀，導(dǎo)致現(xiàn)象不清，無(wú)法較好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?）
必須即配即用，以免生成氫氧化銅沉淀。
斐林試劑和雙縮脲試劑的三點(diǎn)不同
（1）溶液濃度不同
斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液和CuSO4溶液組成，但二者有如下三點(diǎn)不同：
斐林試劑中NaOH溶液稱(chēng)為斐林試劑甲，其濃度為0.1g/mlCuSO4溶液稱(chēng)為斐林試劑乙，其濃度為0.050.1g/ml;雙縮脲試劑中NaOH溶液（雙縮脲試劑A）的濃度為0.1g/ml，CuSO4溶液（雙縮脲試劑B）的濃度為0.01 g/mL。
（2）使用原理不同
斐林試劑是新配制的Cu（OH）2溶液，它在加熱條件下與醛基反應(yīng)，被還原成磚紅色的Cu2O沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時(shí)，溶液的顏色變化過(guò)程為：淺藍(lán)色→棕色→磚紅色（沉淀）。
鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí)，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發(fā)生的是雙縮脲反應(yīng)。雙縮脲反應(yīng)實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的銅離子與雙縮脲試劑發(fā)生的紫色反應(yīng)。而蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，所以蛋白質(zhì)都能與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)，可以用雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)的存在。
（3）使用方法不同
斐林試劑使用時(shí)，先反NaOH溶液和CuSO4溶液混合（將4到5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中），而后立即使用：雙縮脲試劑使用時(shí)，先加入NaOH溶液（2mL），振蕩搖勻，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振蕩搖勻后觀察現(xiàn)象。
由此看出，專(zhuān)門(mén)用于蛋白鑒定試劑的雙縮脲試劑雖然組成與用于還原糖鑒定的菲林試劑相同，但由于溶液濃度、使用原理、使用方法的不同，兩者之間存在不小的差距，大家要使用的時(shí)候一定要看清楚哦。