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公司動態
士鋒生物包埋前免疫納米金單重染色與免疫酶染色結合的染色實驗
點擊次數：703 發布時間：2013-8-2
免疫納米金染色與免疫膠體金―銀法染色基本相似，也可分為包埋前染色和包埋后染色。下面分別介紹包埋前免疫納米金單重染色和與免疫酶染色結合的雙重染色基本程序：
包埋前免疫，納米金單重染色按以下步驟進行免疫染色：
1. 含1%正常血清或1%BSA的PBS預孵育20～30分鐘;
2. 特異性*抗體4℃孵育24～48小時后PBS漂洗3次，每次10分鐘;
3. 納米金標記IgGFab，片段（1：100，Nanoprobes）室溫孵育2小時或4℃孵育12小時后PBS漂洗3次，每次10分鐘，PB漂洗2次，每次10分鐘;
4. PB配制的1%戊二醛固定30分鐘～2小時，隨后PB漂洗2次，每次10分鐘;
5. 4℃下銀加強漂洗緩沖液漂洗2次，每次10分鐘;
6. 4℃下銀加強10―15分鐘（避光）;
7. 4℃下定影液中定影10分鐘后PB漂洗2次，每次10分鐘;
8. PB配制1%鋨酸后固定30―60分鐘;PB漂洗2次，每次10分鐘。
9. 按常規電鏡標本制作方法進行系列乙醇或丙酮脫水、包埋、超薄切片、電子染色和電鏡觀察。
免疫納米金染色法電鏡圖
環氧樹脂包埋前免疫納米金染色示亨廷頓蛋白相關蛋白（huntingtin-associated protein 1.HAP1）在小鼠腦內神經元軸突終末內突觸囊淮上的定位（A1―A3，含HAP1的軸突終末：A4,無HAP1的軸突終末;D1和D2，樹突。箭示納米金一銀顆粒）