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上海士鋒生物科技有限公司給你提供詳細的免疫組化實驗步驟和注意事項
點擊次數：1072 發布時間：2013-7-30
上海士鋒生物科技有限公司給你提供詳細的免疫組化實驗步驟和注意事項
*抗體的染色：
1、 將切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鮮配制）中10分鐘，PBS沖洗2分鐘×3次
2、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）
3、 加入一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）
4、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗2分鐘×3次
5、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2），室溫孵育10分鐘
6、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
7、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-AP（試劑3）的二抗，室溫孵育10分鐘
8、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
9、 準備底物溶液：將1滴試劑4A和4B加入到1ml去離子水中，充分混勻;再加入1滴試劑4C，充分混勻
10、 加100ul（2滴）配好的AP底物溶液，室溫孵育（鏡下檢測孵育時間）
11、 使用含有0.05%吐溫20的去離子水沖洗終止反應
第二抗體的染色：
12、 加100ul（2滴）雙染增強劑（試劑7），孵育
13、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗2分鐘×3次
14、 加100ul（2滴）血清封閉溶液（試劑1）到切片上，室溫孵育10分鐘，倒掉（不能沖洗）
15、 加入稀釋好的一抗（按照說明推薦濃度和孵育條件）
16、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS），沖洗2分鐘×3次
17、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（試劑2），室溫孵育10分鐘
18、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
19、 加入100ul（2滴）鏈霉親和素-HRP（試劑5）的二抗，室溫孵育10分鐘
20、 使用含有0.05%吐溫20的PBS（ TPBS）沖洗2分鐘×3次
21、 準備底物溶液：將1滴試劑6A和6B加入到1ml去離子水中，充分混勻;再加入1滴試劑6C，充分混勻：
22、 加100ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室溫孵育（鏡下檢測孵育時間）
23、 使用含有0.05%吐溫20的去離子水沖洗終止反應
24、 使用復染試劑染色（根據需要選擇）
25、 封片劑（試劑8）封片，顯微鏡觀察結果 免疫學免疫組織化學