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植物細(xì)胞骨架的觀察
點(diǎn)擊次數(shù)：2019 發(fā)布時(shí)間：2017-2-16
細(xì)胞骨架(cytoskeleton)，是細(xì)胞內(nèi)以蛋白質(zhì)纖維為主要成分的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，根據(jù)蛋白質(zhì)纖維的直徑、組成成分和組裝結(jié)構(gòu)的不同可分為微絲、微管和中等纖維。細(xì)胞骨架對(duì)于維持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、物質(zhì)運(yùn)輸、能量轉(zhuǎn)換、信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞分裂等有重要的作用。本試驗(yàn)采用去垢劑TritonX-100 的緩沖液處理植物材料時(shí)，可將細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)和大部分蛋白質(zhì)抽提掉，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白卻被保存下來，后者用考馬斯亮藍(lán)R250 染色，在光學(xué)顯微鏡下可見一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
三、實(shí)驗(yàn)用品
(一)材料 洋蔥
（二）器材 顯微鏡、載玻片、滴管、擦鏡紙、PH 計(jì)
（三）試劑
1. 0.01mol/L 磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)
0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4緩沖液（PB，PH7.3） 50ml
0.15mol/L NaCl
雙蒸餾水加至1000ml
2. PB
0.2mol/L Na2HPO4 77ml
0.2mol/L NaH2PO4 23ml
3. M-緩沖液
咪唑(PH 6.7) 50mmol/L
KCl 50mmol/L
MgC12 0.5mmol/L
EGTA 1mmol/L
EDTA 0.1mmol/L
巰基乙醇 1mmol/L
甘油 4mmol/L
用1mol/L HCl 調(diào)pH 至7.2。
4. 1%的Triton X-100/M-緩沖液
5. 0.2%考馬斯亮藍(lán)R250 染液
甲醇 46.5ml
冰醋酸 7ml
蒸餾水 46.5ml
6. 3%戊二醛- PB 溶液（PH7.3）
四、實(shí)驗(yàn)操作見圖4-4
五、實(shí)驗(yàn)建議
1. 用去垢劑TritonX-100 的緩沖液處理材料時(shí)，應(yīng)控制在30min 左右。
2. 每一次加液或染色后，應(yīng)用PBS 洗2 次，并用濾紙吸干