10
要想更好的使用丁基疏水色譜柱需留意以下事項
丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的，丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產成本息息相關，對于重組蛋白藥物（包括單抗）的非均一性分析變得越來越被重視。TSKgelButyl-NPR（4.6mmIDX3.5cm）已經上市超過20年了，它以對蛋白的高速、高分辨率的分離性能為廣大客戶提供了幫助。新上市的Butyl-NPR（4.6mmIDX10cm）色譜柱具有更高的分辨率，可以滿足生物制藥的研究人員對于HPLC色譜柱的分辨率和分離選擇性的更高要求。
采用具有適度疏水性的填料，以含鹽水溶液作流動相，借助于溶質與固定相間的疏水相互作用實現分離的色譜方法。其保留機理與反相色譜基本相同，所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強，多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質的分離與純化。
丁基疏水色譜柱的使用注意事項：
1、使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統，確保系統干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。
2、取用色譜柱時避免磕碰掉落。
3、將丁基疏水色譜柱入口端連接到系統上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
4、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內將流速升至0.5mL/min。
5、當溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統檢測器上（這樣可以避免氣泡進入檢測系統，并且可快速達到基線平衡）。
6、重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規分析時所使用的流速。
7、參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩定。
8、測試丁基疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物，請廠家部門尋求支持，使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾，提示色譜柱和/或所使用的液相系統處于非理想狀態，需要進行故障排查。當使用2.1mm內徑色譜柱時，建議優化系統以減少譜帶展寬，包括：使用檢測器微量流通池，減少進樣器loop環體積，使用較小內徑（如0.005''或0.12mm）的系統管路。并確保管路與丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積。當使用小顆粒填料（如2.5μm）短柱進行快速分離時，需要考慮以下因素：
1、確保管路丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積，盡量優化系統減少譜帶展寬；
2、提高采樣頻率至10點/秒以上；
3、較小粒徑的色譜柱產生的柱壓較高，而較小粒徑要達到*色譜效率所需的線速度較高，請根據所用LC系統的實際情況調節流速；
4、可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高，例如40?C。使用雜化顆粒反相色譜柱時，可使用45?C或更高。