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技術文章

福林酚法測蛋白含量步驟

閱讀:359          發布時間:2016-4-27

福林酚法測蛋白含量zui早是由Lowry確定的測定蛋白質濃度的基本方法。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。ELISA試劑盒
福林酚法測蛋白含量原理:
蛋白質與福林酚試劑反應,生成深藍色復合物.藍色的深淺與蛋白質含量成正比.可用分光光度計于500nm波長下進行測定.與標準曲線對照,而確定蛋白質含量.
福林酚法測蛋白含量所需試劑
Folin—酚試劑:
1. 試劑甲
1) 4%碳酸鈉溶液
2) 0.2mol/L氫氧化鈉溶液
3) 1%硫酸銅溶液
4) 2%酒石酸鉀鈉溶液。
臨用前將(1)與(2)等體積配制碳酸鈉—氫氧化鈉溶液。(3)與(4)等體積配制成硫酸銅—酒石酸鉀鈉溶液。然后這兩種試劑按50:1的比例配合,即成Folin—酚試劑甲。此試劑臨用前配制,一天內有效。
2. 試劑乙
稱鎢酸鈉100g,鉬酸鈉25g置2000mL磨口回流裝置內,加蒸餾水700mL,85%磷酸50mL和濃硫酸100mL。充分混勻,使其溶解。小火加熱,回流10h(燒瓶內加小玻璃珠數顆,以防溶液溢出),再加入硫酸鋰(LiSO4)150g,蒸餾水50mL及液溴數滴。在通風櫥中開口煮沸15min,以除去多余的溴。冷卻后定容至1000mL,過濾即成Folin—酚試劑乙貯存液,此液應為鮮黃色,不帶任何綠色。置棕瓶中,可在冰箱長期保存。若此貯存液使用過久,顏色由黃變綠,可加幾滴液溴,煮沸幾分鐘,恢復原色仍可繼續使用。
試劑乙貯存液在使用前應確定其酸度。以之滴定標準氫氧化鈉溶液(1mol/L左右),以酚酞為指示劑,當溶液顏色由紅→紫紅→紫灰→墨綠時即為滴定終點。該試劑的酸度應為2mol/L左右,將之稀釋至相當于1mol/L酸度應用。
福林酚法測蛋白含量步驟:
1、標準曲線的制作:分別吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml標準溶液于小試管中,分別加進不同量的蒸餾水,補足到1ml.各加入5ml試劑甲,混勻后于室溫下(25℃左右)放置10min.再加入0.5ml試劑乙,立即混勻,于室溫下反應30min.于500nm波長下測定光密度.以吸光值作為縱坐標,蛋白質含量為橫坐標繪制標準曲線.
2、樣品蛋白質含量的測定
取1ml樣品溶液,加入5ml試劑甲,混勻,于25℃左右放置10min.再加入0.5ml試劑乙,立即搖勻,于25℃左右反應30min,測定吸光值,從標準曲線查出樣品蛋白質含量。
福林酚法測蛋白含量的優點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點是費時較長,要嚴格控制操作時間,標準曲線也不是嚴格的直線形式,且專一性較差,干擾物質較多。

Chemokine Receptor D6    趨化因子受體D6抗體
CHERP    鈣穩態內質網蛋白抗體
CHES1    CHES1蛋白抗體
CHIA    哺乳動物酸性幾丁質酶抗體
CHID1    幾丁質酶結構域蛋白1抗體
Chimaerin 2    嵌合蛋白2/β2-chimaerin抗體
CHIT1    幾丁質酶1抗體
CD97 antigen subunit alpha    白細胞抗原抗體CD97 alpha 抗體
Claudin 2    緊密連接蛋白2抗體
Claudin 7    緊密連接蛋白7抗體
C2orf53     2號染色體開放閱讀框53抗體
C2orf54    2號染色體開放閱讀框54抗體
C2orf56    2號染色體開放閱讀框56抗體

ELISA試劑盒

 

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