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恒遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)下載：抗酶復(fù)合物的應(yīng)用于細(xì)胞ELISA
閱讀：224 發(fā)布時(shí)間：2014-3-31| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 69.4KB |
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應(yīng)用酶標(biāo)抗體進(jìn)行免疫測(cè)定的方法較多，非均相酶免疫測(cè)定是目前應(yīng)用zui廣泛的一類酶免疫檢測(cè)技術(shù)，其中以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)zui常用，它可用于測(cè)定抗體，也可測(cè)定可溶性抗原及細(xì)胞抗原。而酶-抗酶復(fù)合物多用于免疫組織化學(xué)。以下著重介紹ELISA和免疫酶組化技術(shù)。
試劑及配制
1、洗滌液（pH 7.4 PBS)
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H20 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
蒸餾水加至 1000ml
2、一抗或配體和酶標(biāo)抗體
操作方法
1、將不同數(shù)量的陽(yáng)性或陰性細(xì)胞與不同濃度的抗體進(jìn)行反應(yīng)，用以確定zui適細(xì)胞數(shù)和抗體的工作濃度；
2、將細(xì)胞懸液于4℃，1500r/min離心5min，棄上清，重懸于冰冷的洗滌液中，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度；
3、取錐形或圓形凹孔板，加入zui適細(xì)胞數(shù)（1-5´105個(gè)/孔），100ml/孔，4℃，1500r/min離心5min，吸去上清；
4、混合器短時(shí)振搖，使沉淀的細(xì)胞分散；
5、加入一定稀釋度抗體或配體，4℃孵育1.5h，間隔15min輕輕振搖一次；
6、4℃，1500r/min離心5min，吸去上清；用洗滌液洗滌3次，棄上清；
7、加入zui適工作濃度酶標(biāo)抗抗體或酶標(biāo)抗體（抗配體），4℃孵育1.5h，間隔15min輕輕振搖一次；
8、4℃，1500r/min離心5min，吸去上清；用洗滌液洗滌3次，棄上清；
9、加入底物溶液，100ml/孔，避光室溫顯色20-30min，間隔10min輕輕振搖一次；
10、4℃，1500r/min離心5min，轉(zhuǎn)移上清至空孔中，用酶聯(lián)檢測(cè)儀測(cè)定OD值。