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北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司
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PCR擴(kuò)增儀是利用PCR技術(shù)對(duì)特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備，被廣泛運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，例如用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。將轉(zhuǎn)錄和翻譯在單細(xì)胞水平上聯(lián)系起來(lái)，為深入理解分子生物學(xué)中心法則提供了新的視角。
轉(zhuǎn)錄和翻譯是分子生物學(xué)中心法則中基因表達(dá)的兩個(gè)基本過(guò)程。細(xì)胞的克隆群體可能存在高度異質(zhì)性，即同樣的基因在不同的細(xì)胞個(gè)體中具有不同的mRNA和蛋白拷貝數(shù)。這種基因表達(dá)上的變異會(huì)導(dǎo)致不同的表型，影響諸多細(xì)胞的功能，包括發(fā)育、體內(nèi)穩(wěn)態(tài)、疾病過(guò)程。要想了解這種基因差異表達(dá)的原因和結(jié)果，需要在單細(xì)胞水平對(duì)mRNA和蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量。PCR擴(kuò)增儀的出現(xiàn)，為科學(xué)家們提供了簡(jiǎn)單可行的手段，無(wú)需繁瑣的遺傳學(xué)操作，易于重復(fù)和推廣。
在單細(xì)胞水平計(jì)數(shù)mRNA的拷貝數(shù)已應(yīng)用于很多研究，而在單細(xì)胞水平計(jì)數(shù)蛋白質(zhì)分子的數(shù)量則相當(dāng)具有挑戰(zhàn)性。現(xiàn)有的各種技術(shù)需要繁瑣的遺傳操作或復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，而且往往只能獲得蛋白質(zhì)的相對(duì)豐度。為了解決這個(gè)問(wèn)題，科學(xué)家將ddPCR技術(shù)與鄰近連接測(cè)試技術(shù)相結(jié)合，并建立的數(shù)學(xué)模型，實(shí)現(xiàn)對(duì)單個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的蛋白拷貝數(shù)的定量。真核生物或原核生物中都能觀察到單細(xì)胞中mRNA和蛋白含量的瞬時(shí)相關(guān)性很低的情況，這種弱相關(guān)性可能源自mRNA和蛋白質(zhì)半衰期的差異，亦或是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因素導(dǎo)致不同細(xì)胞間每個(gè)mRNA分子翻譯的蛋白質(zhì)數(shù)量的差異。
動(dòng)態(tài)基因調(diào)控在各種細(xì)胞調(diào)控系統(tǒng)中廣泛存在，隨著研究的深入，單細(xì)胞分析技術(shù)和方法獲得越來(lái)越多的重視和發(fā)展。PCR擴(kuò)增儀流程簡(jiǎn)單，易于推廣。籍此科學(xué)家們能對(duì)單個(gè)細(xì)胞中基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯拍攝數(shù)字快照，通過(guò)數(shù)字化定量勾勒出基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，更加深入解析基因調(diào)控的本質(zhì)和基本原理。
