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人瘧疾ELISA試劑盒說明書

時間:2015/8/28閱讀:758
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人瘧疾酶聯免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用

目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關

液體樣本中瘧疾。

實驗原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中人瘧疾。用純化的瘧疾抗體包

被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中瘧疾相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后

再與  HRP標記的瘧疾抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物

TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用

酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),與   CUTOFF值相比較,從而判定標本中瘧疾

的存在與否。

操作步驟:

1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2孔、陽性對照  2孔、空白對照   1

孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照   50μl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液  40μl,然后再加待測樣品  10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不

觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液:將 3048T的  20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至  600ml后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此

重復 5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同 3

8.洗滌:操作同 5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15分鐘

10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止

液后 15分鐘以內進行。

結果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00;陰性對照平均值0.10

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品 OD<臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陰性

陽性判定:樣品 OD臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為  630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時必須

注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月


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